2結(jié)果與分析

2.1黑木耳胞外多糖紅外光譜鑒定

每升黑木耳發(fā)酵液能提取多糖244mg，純度為85.3%，F(xiàn)Ｔ-IR光譜顯示，黑木耳胞外多糖為具有典型β-吡喃糖結(jié)構(gòu)的復(fù)雜多糖（圖1），官能團(tuán)分析表明，在3419cm^-1處的寬峰是-OH伸縮振動(dòng)吸收峰，2973cm^-1和2918cm^-1處的弱吸收帶是-CH伸縮振動(dòng)吸收峰，1735cm^-1和1638cm^-1處的吸收峰表明含有糖醛酸，1383cm^-1是-CH彎曲振動(dòng)吸收峰，1078cm^-1和1048cm^-1處的吸收峰是C-O-H和C-O-C中的C-O引起的振動(dòng)吸收；880cm^-1是β-糖苷鍵的特征吸收峰。

2.2黑木耳胞外多糖的單糖組成分析

黑木耳胞外多糖經(jīng)過(guò)酸水解和衍生化后，利用HPLC分析其單糖組成。結(jié)果顯示，葡萄糖和木糖為其主要的單糖組分（物質(zhì)的量比為53.85%和25.05%），還有少量的甘露糖、果糖、巖藻糖、阿拉伯糖和葡萄糖醛酸（表1）。與紅外光譜分析結(jié)果一致，黑木耳胞外多糖是由多種單糖組分構(gòu)成的雜合多糖。

2.3黑木耳胞外多糖對(duì)小鼠體重及臟體比的影響

與對(duì)照組相比，灌胃黑木耳胞外多糖后小鼠體重?zé)o明顯變化（圖2）。臟器系數(shù)是反映動(dòng)物器官發(fā)育的重要指標(biāo)，可直觀反映受試物對(duì)動(dòng)物存在的毒害作用。本研究通過(guò)稱量小鼠各臟器組織質(zhì)量，計(jì)算其臟器系數(shù)。黑木耳胞外多糖對(duì)小鼠臟器系數(shù)的影響見(jiàn)表2，統(tǒng)計(jì)分析顯示，樣品組與對(duì)照結(jié)果無(wú)顯著性差異（P＞0.05）。上述試驗(yàn)表明，灌胃黑木耳胞外多糖不會(huì)引起小鼠臟器發(fā)生病理性異常。

2.4黑木耳胞外多糖對(duì)小鼠腸道菌群的影響

本試驗(yàn)利用微生物16SrRNA基因測(cè)序技術(shù)，探索了灌胃黑木耳胞外多糖小鼠腸道菌群的變化情況。測(cè)序所得原始數(shù)據(jù)經(jīng)篩選過(guò)濾后，對(duì)獲得的序列進(jìn)行可操作單元分析（OＴU）歸并劃分，采用Greengenes數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行注釋，通過(guò)多種多變量統(tǒng)計(jì)學(xué)分析工具對(duì)不同樣本（組）微生物群落結(jié)構(gòu)差異進(jìn)行分析，得到了小鼠腸道微生物16SrRNA在屬水平OＴU序列的相對(duì)豐度（圖3）。通過(guò)Metastats對(duì)樣本組間序列量差異的比較檢驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，與對(duì)照組相比，擬桿菌屬和羅氏菌屬顯著增加（P＜0.05），擬桿菌屬在多糖組腸道微生物群中占（10.31±1.5）%，而對(duì)照組為（5.4±1.38）%；羅氏菌屬在多糖組中占（0.17±0.07）%，而在對(duì)照組中未檢測(cè)到。

2.5黑木耳胞外多糖對(duì)小鼠腸道短鏈脂肪酸含量的影響

腸道微生物通過(guò)膳食纖維的發(fā)酵和短鏈脂肪酸（SCFAs）的產(chǎn)生來(lái)提高能量利用率，從而提高宿主代謝效率。本試驗(yàn)將小鼠糞便樣品按照冷凍干燥糞便樣品，準(zhǔn)確稱取50mg樣品，加入1.2mL磷酸鹽緩沖液（pH7.3）混勻，4℃14000r/min離心20min，吸取上清液至5mL離心管中。每200μL上清加入0.1mL的稀釋后硫酸（體積分?jǐn)?shù)50%），充分混勻3min，用2mL二氯甲烷（色譜級(jí)）進(jìn)行萃取，4℃靜置2h，然后用0.22μm有機(jī)濾膜過(guò)濾。采用氣相色譜（GC）檢測(cè)樣品中短鏈脂肪酸的含量，樣品提取方法參照Z(yǔ)hao等并做部分修改。GC分析采用常規(guī)HP-FFAP（25m×0.32mm，0.5μm）配置柱，程序設(shè)定參照賈益群等在生物樣品脂肪酸提取與分析的研究結(jié)果，并調(diào)整其分流比為20∶1。SCFA標(biāo)準(zhǔn)品溶液的配置以及標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制參照孟拓等對(duì)氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法分析腸道炎小鼠短鏈脂肪酸代謝研究結(jié)果。

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