基質(zhì)匹配混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液：取1mL猴耳環(huán)空白基質(zhì)溶液，采用氮吹濃縮至約0.5mL，分別加入農(nóng)藥混合標(biāo)準(zhǔn)溶液10、20、50、100、150和200μL，用乙腈稀釋并定容至1mL，配制成系列質(zhì)量濃度的基質(zhì)匹配混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，現(xiàn)配現(xiàn)用。

分別量取基質(zhì)匹配混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液及將猴耳環(huán)樣品粉碎，過(guò)三號(hào)篩后，稱取5g(精確到0.01g)于50mL聚苯乙烯聚塞離心管中，加入1g氯化鈉，混勻，加入20mL乙腈，于8000r/min下勻漿提取20min，于3500r/min下離心5min；收集上清液，重復(fù)提取兩次；合并上清液，于40℃水浴濃縮至3～5mL，用1～2mL乙腈多次洗滌并轉(zhuǎn)移至10mL容量瓶中，用乙腈定容至刻度，搖勻，于3500r/min下離心3min；取3mL上清液，過(guò)HLB固相萃取柱(無(wú)需活化，直接上樣過(guò)柱)，收集全部?jī)艋?，混勻，待測(cè)。農(nóng)藥空白猴耳環(huán)基質(zhì)同法制備的樣品溶液各1mL，加入0.1mL水，混勻，過(guò)0.22μm微孔濾膜。色譜條件：菲羅門KinetexC18色譜柱(100mm×2.1mm,2.6μm)及預(yù)保護(hù)柱(4mm×2.0mm，2.6μm)；流動(dòng)相A相為95%乙腈(含5mmol/L甲酸銨和0.1%甲酸)，B相為水(含5mmol/L甲酸銨和0.1%甲酸)。梯度洗脫程序：0～1min，30%A；＞1～12min，30%→100%A；＞12～14min，100%A；＞14～15min，100%→30%A；＞15～20min，30%A。流速0.3mL/min；柱溫40℃；樣品盤溫度20℃。進(jìn)樣體積2μL。質(zhì)譜條件：電噴霧離子源正離子掃描模式(ESI+)，依賴保留時(shí)間的多反應(yīng)監(jiān)測(cè)模式(scheduledMRM)，檢測(cè)窗60s。氣簾氣(CUR)0.01MPa，碰撞氣(CAD)0.06MPa，噴霧電壓(IS)5500V，離子化溫度(TEM)600℃，霧化氣(GS1)與輔助氣(GS2)均為0.35MPa條件測(cè)定，以各農(nóng)藥的質(zhì)量濃度(x)為橫坐標(biāo)，以各農(nóng)藥的定量離子峰的峰面積響應(yīng)值(y)為縱坐標(biāo)，繪制校正曲線，權(quán)重系數(shù)選擇1/x，得到47種農(nóng)藥的回歸方程及相關(guān)系數(shù)。

2.結(jié)果與分析

2.1質(zhì)譜條件的優(yōu)化

采用農(nóng)藥單一標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行質(zhì)譜掃描獲取離子對(duì)信息，根據(jù)響應(yīng)值優(yōu)化碰撞電壓、去簇電壓等參數(shù)，每個(gè)待測(cè)物篩選出2～4組特征離子對(duì)。根據(jù)猴耳環(huán)基質(zhì)特點(diǎn)，每種農(nóng)藥選擇2組響應(yīng)值高且干擾少的特征離子對(duì)作為監(jiān)測(cè)離子對(duì)，其中豐度最高的選為定量離子對(duì)，所有離子對(duì)均為定性離子。選擇依賴保留時(shí)間的多反應(yīng)監(jiān)測(cè)模式，在化合物保留時(shí)間±30s內(nèi)掃描，獲得準(zhǔn)確的定性及定量結(jié)果。

根據(jù)《中國(guó)藥典》進(jìn)行樣品測(cè)定時(shí)，如果檢出的色譜峰保留時(shí)間與對(duì)照品一致，且離子豐度比與對(duì)照品的離子豐度比一致(相對(duì)豐度＞50%，允許±10%偏差；相對(duì)豐度＞20%～50%，允許±15%偏差；相對(duì)豐度＞10%～20%，允許±20%偏差；相對(duì)豐度≤10%，允許±50%偏差)，則可判定為檢出。優(yōu)化后的質(zhì)譜參數(shù)見(jiàn)表1，典型色譜圖見(jiàn)圖1。

2.2樣品前處理?xiàng)l件的優(yōu)化

猴耳環(huán)藥用部位為干燥葉，含水量低(低于8%)，且含較多葉綠素、纖維等?？紤]到方法的通用性及便捷性，采用乙腈勻漿提取制備原液，但原液渾濁，呈深綠色，超過(guò)50%的檢測(cè)指標(biāo)回收率低于50%，基質(zhì)干擾大，需要凈化。HLB是由親脂性二乙烯苯和親水性N-乙烯基吡咯烷酮兩種單體按一定比例聚合成的大孔共聚物，保留機(jī)理為反相，適用于pH值范圍較寬的多種分析物。HLB固相萃取柱與乙腈提取液聯(lián)合使用時(shí)無(wú)需活化，直接過(guò)柱，操作簡(jiǎn)單，大大降低了試驗(yàn)難度。結(jié)果表明，經(jīng)HLB固相萃取柱凈化后，80%以上的待測(cè)物回收率在70%～120%之間。

2.3基質(zhì)效應(yīng)

本研究采用絕對(duì)法評(píng)價(jià)基質(zhì)效應(yīng)(Me)，當(dāng)Me在85%～115%時(shí)，基質(zhì)效應(yīng)在可控范圍，基質(zhì)效應(yīng)對(duì)結(jié)果的影響可忽略，當(dāng)Me＞115%或＜85%時(shí)，基質(zhì)效應(yīng)對(duì)結(jié)果的影響表現(xiàn)為抑制或增強(qiáng)效應(yīng)，應(yīng)對(duì)測(cè)得值進(jìn)行校正。結(jié)果顯示，有41種農(nóng)藥的Me在85%～115%之間，表明其影響可忽略不計(jì)；而甲胺磷受基質(zhì)嚴(yán)重抑制影響(Me＜50%)，氧化樂(lè)果、吡蟲啉、涕滅威亞砜和多菌靈受基質(zhì)輕度抑制影響(60%＜Me＜85%)，敵百蟲受基質(zhì)輕度增強(qiáng)影響(Me＞115%)。因此，本研究采用基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行校正。

2.4方法線性范圍、靈敏度、準(zhǔn)確度及精密度

結(jié)果顯示，47種農(nóng)藥在各自的線性范圍內(nèi)，其質(zhì)量濃度與對(duì)應(yīng)的峰面積間均呈良好的線性關(guān)系(r＞0.9920)。以10倍信噪比的最低添加水平確定其定量限(LOQ)為0.001～0.015mg/kg。在LOQ、5倍LOQ、20倍LOQ3個(gè)添加水平下，47種農(nóng)藥在猴耳環(huán)中的平均回收率在54%～117%之間，RSD(n=6)在2.0%～15%之間，其中40種農(nóng)藥平均回收率在70%～120%之間，符合農(nóng)藥殘留分析要求。部分農(nóng)藥的回收率較低，可能與復(fù)雜基質(zhì)的干擾或自身極性、穩(wěn)定性等理化性質(zhì)有關(guān)。

2.5實(shí)際樣品測(cè)定結(jié)果

根據(jù)產(chǎn)地及采集樣本數(shù)目按比例選擇20批樣品，運(yùn)用所建立的方法測(cè)定。結(jié)果顯示，共有4批次樣品檢出農(nóng)藥(表3)。其中，苯線磷和甲胺磷均為農(nóng)業(yè)農(nóng)村部規(guī)定的禁用農(nóng)藥，炔螨特為常見(jiàn)的廣譜殺蟲殺螨劑。根據(jù)《中國(guó)藥典》2020年版通則0212規(guī)定：禁用農(nóng)藥不得檢出(低于定量限)，苯線磷與甲胺磷定量限分別為0.02和0.05mg/kg。表明樣品殘留量均未超過(guò)標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定。

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