2.4基于舒筋活血膠囊成分的可測(cè)性辨識(shí)潛在的Q-marker

依據(jù)可測(cè)性原則，查閱中國(guó)藥典明確規(guī)定九味藥材中6個(gè)定量成分的測(cè)定方法和限度要求，分別為羥基紅花黃色素A（指標(biāo)含量≥1.0%）、原兒茶酸（指標(biāo)含量≥0.02%）、刺五加苷B（指標(biāo)含量≥0.04%）、4-甲氧基水楊醛（指標(biāo)含量≥0.20%）、絡(luò)石苷（指標(biāo)含量≥0.45%）以及山奈素。α-香附酮、豆甾醇、β-谷甾醇、木酚素、β-胡蘿卜素和除蟲(chóng)菊素已有文獻(xiàn)報(bào)道其含量測(cè)定的方法。丁香脂素、高圣草素-7-O-β-D-芹菜糖基(1→2)-β-D-葡萄糖苷、杠柳苷A、去甲絡(luò)石苷和玉柏堿無(wú)文獻(xiàn)明確報(bào)道其含量測(cè)定的方法。

2.5基于舒筋活血膠囊的有效性辨析潛在的Q-marker

Q-marker的核心要素是“有效”，因?yàn)閷?duì)中藥有效性的控制是質(zhì)量控制的根本目的，基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)從“中藥-成分-靶標(biāo)-通路”網(wǎng)絡(luò)圖中發(fā)現(xiàn)與疾病相關(guān)的中藥化學(xué)成分作為候選的質(zhì)量標(biāo)志物，是有效性的藥效研究的關(guān)鍵思路。在臨床上已經(jīng)證明舒筋活血膠囊治療骨質(zhì)疏松癥具有較好的臨床療效，因此，我們選擇以骨質(zhì)疏松癥為疾病模型。

基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的研究方法，探究舒筋活血膠囊治療骨質(zhì)疏松癥發(fā)揮藥效的化學(xué)成分及其作用的基因靶點(diǎn)與信號(hào)通路。在TCMSP數(shù)據(jù)庫(kù)中逐一輸入舒筋活血膠囊各單味藥材名稱(chēng)，收集各味藥材目前收錄于該數(shù)據(jù)庫(kù)的所有化學(xué)成分，根據(jù)其ADME（吸收、分布、代謝、排泄）OB≥30%，DL≥0.18，CACO-2≥0.4，BBB≥-0.3對(duì)化學(xué)成分的類(lèi)藥性進(jìn)行評(píng)分，選出其中的活性成分。舒筋活血膠囊中總共篩選出16個(gè)活性化合物，見(jiàn)表2，其中紅花8個(gè)活性化合物、香加皮3個(gè)活性化合物、絡(luò)石藤3個(gè)活性化合物、伸筋草3個(gè)活性化合物、雞血藤6個(gè)活性化合物、澤蘭2個(gè)活性化合物、香附3個(gè)活性化合物，槲寄生3個(gè)活性化合物，狗脊中并無(wú)活性成分。

判斷中藥復(fù)方有效性的指標(biāo)是靶點(diǎn)的有無(wú)及作用的強(qiáng)弱，將收集的所有活性化合物輸入到Genecards數(shù)據(jù)庫(kù)，收集所有活性成分和疾病“Osteoporosis”靶點(diǎn)，篩選出每個(gè)化合物與疾病“Osteoporosis”的相同靶點(diǎn)。故在Uniprot數(shù)據(jù)庫(kù)中，輸入整理的相同靶點(diǎn)基因名稱(chēng)進(jìn)行檢索，得到基因的ID。將上述獲得的基因的ID輸入到DAVID數(shù)據(jù)庫(kù)，進(jìn)行KEGG通路富集分析，富集分析后將所得的結(jié)果設(shè)置成FDR＜0.05、P＜0.01作為顯著性強(qiáng)的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行篩選，篩選出重要的信號(hào)通路并分析。

將上述活性成分、基因靶點(diǎn)、信號(hào)通路相互作用的數(shù)據(jù)整理成表格。整理藥材和活性成分、活性成分與靶點(diǎn)、靶點(diǎn)與信號(hào)通路之間的相互關(guān)系。將上述數(shù)據(jù)聯(lián)系導(dǎo)入Cytoscape軟件中，得到“藥材-化合物成分-基因靶點(diǎn)-信號(hào)通路”之間相互作用和關(guān)聯(lián)的網(wǎng)絡(luò)圖（見(jiàn)圖3）。

收集各化合物和疾病Osteoporosis的基因靶點(diǎn)，其中疾病Osteoporosis的靶點(diǎn)基因4078個(gè)，化合物與疾病相同基因靶點(diǎn)有184個(gè)。得到的相同的基因靶點(diǎn)ID輸入到DAVID數(shù)據(jù)庫(kù)中，舒筋活血膠囊中所有化合物涉及的184個(gè)靶點(diǎn)基因分析了83.9%通路，所作用的信號(hào)通路信息共135條，以FDR＜0.05、P＜0.01篩選出78條通路，選擇前23條信號(hào)通路分析，其具體信息如表格3所示，舒筋活血膠囊里的有效成分通過(guò)這些通路來(lái)實(shí)現(xiàn)治療骨質(zhì)疏松癥的目的。

如圖3所示，從上至下依次為舒筋活血膠囊的單味藥材、藥材中發(fā)揮作用的活性成分、活性成分所作用的基因靶點(diǎn)、基因靶點(diǎn)所涉及的信號(hào)通路。該圖直觀的呈現(xiàn)出舒筋活血膠囊中“藥材-化合物成分-基因靶點(diǎn)-靶點(diǎn)通路”之間的關(guān)系。

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