目的 采用UPLC-Q-TOF-MS/MS技術(shù)對(duì)六味地黃苷糖片中的化學(xué)成分進(jìn)行分析和鑒定。方法 色譜柱為phenomenexLunaC18（250mm×4.6mm，5μm），以乙腈-0.3%甲酸水溶液作為流動(dòng)相，梯度洗脫，體積流量1mL/min，柱溫35℃，進(jìn)樣量10μL；采用電噴霧離子源（ESI），負(fù)離子模式下采集數(shù)據(jù)，根據(jù)精確質(zhì)荷比、二級(jí)碎片離子信息，結(jié)合對(duì)照品和文獻(xiàn)數(shù)據(jù)鑒定六味地黃苷糖片中的化學(xué)成分。結(jié)果共鑒定和推測(cè)出71個(gè)化合物，其中25個(gè)來(lái)自酒萸肉，19個(gè)來(lái)自熟地黃，31個(gè)來(lái)自牡丹皮，2個(gè)來(lái)自澤瀉，3個(gè)來(lái)自茯苓，2個(gè)來(lái)自山藥。其中22個(gè)化合物經(jīng)對(duì)照品驗(yàn)證。結(jié)論該結(jié)果基本明確了六味地黃苷糖片的化學(xué)物質(zhì)基礎(chǔ)，為六味地黃苷糖片的質(zhì)量控制及藥效物質(zhì)基礎(chǔ)研究提供了參考。六味地黃湯是中醫(yī)滋補(bǔ)腎陰的經(jīng)典名方，由熟地黃、酒萸肉、牡丹皮、山藥、茯苓、澤瀉組成，由宋朝名醫(yī)錢乙首創(chuàng)，主要用于腰膝酸軟、頭暈?zāi)垦?、耳聾耳鳴、盜汗自汗等腎陰不足之癥。近代實(shí)踐證明，六味地黃方廣泛應(yīng)用于治療腎臟疾病、更年期綜合癥、高血壓、肝臟疾病等數(shù)十種疾病。

六味地黃苷糖片是基于對(duì)六味地黃湯的大量基礎(chǔ)研究開(kāi)發(fā)而成，用于治療伴有腎陰虛的更年期綜合癥。該藥從湯劑出發(fā)，經(jīng)過(guò)兩步醇沉、兩步層析分離得到了苷類、多糖以及寡糖等三個(gè)有效部位，在此基礎(chǔ)上得到了六味地黃苷糖片。

研究表明六味地黃苷糖片具有改善慢性多重不可預(yù)期應(yīng)激所致焦慮抑郁樣行為及阿爾茨海默病動(dòng)物模型轉(zhuǎn)基因小鼠認(rèn)知缺陷的作用，其中苷類成分對(duì)免疫及內(nèi)分泌調(diào)節(jié)起重要作用。為闡明六味地黃苷糖片的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)，本實(shí)驗(yàn)對(duì)六味地黃苷糖片中的化學(xué)成分（主要為苷類成分）進(jìn)行了研究，運(yùn)用UPLC-Q-TOF-MS/MS技術(shù)對(duì)六味地黃苷糖片中的成分進(jìn)行定性分析，為六味地黃苷糖片的質(zhì)量控制及藥效物質(zhì)基礎(chǔ)研究提供依據(jù)。

1 材料

Agilent 1290超高效液相色譜儀（DAD檢測(cè)器，美國(guó)安捷倫公司）；Agilent 6538 Q-TOF質(zhì)譜儀（美國(guó)安捷倫公司）；Mettler Toledo XP6電子分析天平（瑞士梅特勒公司），1/100萬(wàn)；Mettler Toledo AL204電子分析天平（瑞士梅特勒公司），1/10萬(wàn)；KQ-500DB型超聲波清洗器（昆山超聲儀器有限公司）；Milli-Q Academic純水儀（美國(guó)密理博公司）。色譜乙腈（德國(guó)默克）；色譜甲酸（美國(guó)天地）。

莫諾苷（111998-201703，97.4%，中國(guó)食品藥品檢定研究院），馬錢苷（111640-201808，99%，中國(guó)食品藥品檢定研究院），芍藥苷（110736-201943，95.1%，中國(guó)食品藥品檢定研究院），牡丹酚原苷（200302，98%，南京森貝伽生物），腺苷（201901，98%，南京森貝伽生物），獐芽菜苷（7001，98%，上海施丹德），毛蕊花糖苷（111530-201914，95.2%，中國(guó)食品藥品檢定研究院），異毛蕊花糖苷（7283，98%，上海施丹德）, 松果菊苷（201904，98%，南京森貝伽生物，氧化芍藥苷（19120604，99.67%，成都普菲德生物技術(shù)有限公司），山茱萸新苷（19080905，98%，成都普菲德），地黃苷D（7433，98%，上海施丹德），沒(méi)食子酰芍藥苷（201901，98%，南京森貝伽生物），馬錢苷酸（111865-201704，97.4%，中國(guó)食品藥品檢定研究院），連翹酯苷E（DSTDL008301, 98%, 德斯特生物），丹皮酚新苷（DST200910-076，98%，德斯特生物），獐芽菜苦苷（110785-201404，98.3%，中國(guó)食品藥品檢定研究院），8-表番木鰲酸（DST200422-157，98%，德思特生物），焦地黃苯乙醇苷B（LOT8184，98%，上海詩(shī)丹德），沒(méi)食子酸（110831-201605，90.8%中國(guó)食品藥品檢定研究院）。六味地黃苷糖片（20181001），江蘇康緣藥業(yè)股份有限公司生產(chǎn)。

2 方法

2.1 檢測(cè)條件

2.1.1 色譜條件

色譜柱為phenomenex Luna C18（250 mm×4.6 mm，5 μm），流動(dòng)相為乙腈（A）-0.3%甲酸水溶液（B），梯度洗脫（0-22 min，4%-8%A；31-60 min，8%-14%A；65-80 min，18%-25%A；85 min, 90%A），柱溫35 ℃，流速1 mL·min-1，檢測(cè)波長(zhǎng)250 nm，進(jìn)樣量10 μL。

2.1.2 質(zhì)譜條件

電噴霧離子源（ESI），負(fù)離子模式，毛細(xì)管電壓4 000 V，質(zhì)量掃描范圍100-2 000；干燥氣溫度350 ℃；干燥氣體積流量10 L·min-1；霧化氣壓力275.75 kPa;裂解電壓100 V；錐孔電壓65 V；碰撞能量根據(jù)不同化合物的需要選取15～40 eV。

2.2 溶液的配制

2.2.1 對(duì)照品溶液的配制

分別取莫諾苷、馬錢苷、芍藥苷、牡丹酚原苷、丹皮酚新苷、山茱萸新苷、腺苷、獐芽菜苷、毛蕊花糖苷、異毛蕊花糖苷、松果菊苷、氧化芍藥苷、地黃苷D、沒(méi)食子酰芍藥苷、、8-表番木鰲酸、焦地黃苯乙醇苷B、獐牙菜苦苷、連翹酯苷E、馬錢苷酸、沒(méi)食子酸適量置于容量瓶中，用水溶解稀釋至刻度，制備成含各成分50～100 μg/mL混合對(duì)照品溶液，經(jīng)0.22 μm微孔濾膜過(guò)濾備用。

2.2.2 供試品溶液的配制

取六味地黃苷糖片10片，研細(xì)，取約0.2 g，精密稱定，置10 mL容量瓶中，加純水適量，超聲處理（功率250 W，頻率40 kHz）5分鐘，放冷，用水稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，經(jīng)0.22 μm微孔濾膜過(guò)濾即得。

3 結(jié)果與分析

按2.1項(xiàng)下條件檢測(cè)六味地黃苷糖片供試品溶液，得到對(duì)照品及六味地黃苷糖片負(fù)離子模式下總離子色譜圖（TIC），見(jiàn)圖1、2。根據(jù)精確質(zhì)荷比，二級(jí)碎片離子信息，結(jié)合對(duì)照品和文獻(xiàn)數(shù)據(jù)共鑒定和推測(cè)出71個(gè)化合物，其中25個(gè)來(lái)自酒萸肉，19個(gè)來(lái)自熟地黃，31個(gè)來(lái)自牡丹皮，2個(gè)來(lái)自澤瀉，3個(gè)來(lái)自茯苓，2個(gè)來(lái)自山藥。

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