2、蒸餾法的操作步驟和注意事項

(1)蒸餾裝置的組成

減壓蒸餾裝置主要由3部分組成，包括蒸餾部分、抽氣部分以及在它們之間的保護和測壓裝置。

①蒸餾部分：蒸餾部分由蒸餾瓶、冷凝器和接收瓶組成。蒸餾瓶采用兩個頸的克氏蒸餾瓶，一個頸插溫度計，另一個頸插一根毛細管，起到防止暴沸作用。冷凝器采用普通冷凝管，接收瓶為普通接收瓶。

②抽氣部分及保護和測壓裝置：這兩部分主要由真空泵、真空膠管、保護裝置和測壓裝置組成。在保護系統(tǒng)中，要有安全瓶，主要用于調(diào)節(jié)系統(tǒng)壓力及放氣。封閉式壓力計用于測量系統(tǒng)中的實際壓力。設3個吸收塔，第一個裝無水氯化鈣或硅膠，用于吸水；第二個裝粒狀氫氧化鈉，用于吸酸；第三個裝石蠟片，可吸收烴類氣體。普通旋片式真空泵達不到工作壓力時，還應串聯(lián)真空擴散泵。

減壓蒸餾時，必須保證系統(tǒng)不漏氣，各接口要涂好真空脂，不可用普通膠管代替真空膠管。

(2)蒸餾具體操作步驟

①加料：液體量不要超過克氏蒸餾瓶容積的一半，可防止暴沸或液體的飛沫被蒸氣帶走。克氏蒸餾瓶要有2/3浸入到浴液中。

②減壓檢漏，調(diào)壓：調(diào)整到需要的壓力，如敵敵畏為0.1Pa。減壓蒸餾，采用磁力加熱攪拌器是一種非常簡便、高效的方法。

③加熱：100°C以下樣品采用水浴，100～250°C油浴(甘油等)，250°C以上砂浴，超過250℃時不能采用玻璃蒸餾器。

④沸騰：此時，溫度計指示急劇上升。

⑤蒸餾：開始蒸餾時既不要快也不能太慢，控制速度為每秒1～2滴。接前餾分，注意觀察壓力和溫度的變化。當達到所需餾分沸點時，更換接收瓶；當溫度超過所需餾分沸點時，停止蒸餾。減壓蒸餾法對在常壓下蒸餾易分解或遇熱易分解的樣品非常有效。一般要進行2～3次重蒸餾，才能達到要求。

(3)蒸餾注意事項

溫度計水銀球的上限與克氏蒸餾瓶支管下限在一水平面上，先攪拌、減壓，后升溫。

減壓蒸餾法適用的農(nóng)藥品種有：2，4-滴丁酯、敵敵畏、稻瘟凈、禾草丹等。

(三)柱層析法

柱層析法的特點是應用范圍廣，固體、液體都適宜，操作簡便，分離效率高。

1、柱層析的基本原理

根據(jù)組分在固定相中的作用原理不同，柱層析可分為吸附層析、分配層析、離子交換層析和排阻層析。農(nóng)藥純化常用吸附層析和分配層析。

(1)吸附層析：吸附層析根據(jù)固定相(吸附劑)對混合物中各組分的吸附能力不同實現(xiàn)分離和純化。例如用硅膠作固定相，當混合物的溶液流經(jīng)固定相時，混合物中各組分就被吸附在硅膠顆粒表面上：再用單一溶劑或混合溶劑作流動相淋洗該柱，由于硅膠對混合物中各組分的吸附能力不同，已被吸附在硅膠上的各組分就會以不同的速度解吸并重新回到溶劑中。隨著溶劑的向前移動，已解吸的各組分遇到新的吸附劑就又再一次以不等的吸附力被吸附，當新的流動相流過時，它們就又一次解吸進入流動相并向前移動。如此在層析柱上不斷地發(fā)生吸附、解吸、再吸附、再解吸，使混合物中各組分在吸附劑表面上表現(xiàn)出的吸附能力的微小差異，經(jīng)多次重復積累而成為大的差異。結果吸附力小的組分先從層析柱中流出，吸附力大的組分后從柱中流出，從而達到分離的目的。

(2)分配層析：分配層析與吸附層析的不同之處是混合物中各組分的分離是根據(jù)其在兩相中的分配系數(shù)的差異來實現(xiàn)的。吸附層析實質(zhì)屬于液固色譜范疇，而分配層析屬于液液色譜范疇。

2、柱層析的基本操作步驟

(1)選擇層析柱：層析柱的長度和口徑之比以10：1為宜，堿式滴定管可當層析柱來使用。

(2)選擇吸附劑：吸附劑的要求為：①不溶于選用的淋洗液；②不與淋洗液和分離組分起化學反應，也不起催化作用；③無色，粒度均勻，細度合適。常用吸附劑有硅膠、氧化鋁、弗羅里硅土等。

一般分離極性強的物質(zhì)，選用吸附力小的吸附劑；分離極性弱的物質(zhì)，應選用吸附力強的吸附劑。

(3)填裝吸附劑：填裝吸附劑時，要求均勻緊密一致。填裝有干法和濕法兩種，干法不容易填裝均勻，濕法容易裝好層析柱。濕法是稱取適量的吸附劑，一般為分離樣品質(zhì)量的50倍，加入溶劑調(diào)和，調(diào)好后倒人柱中，使其自然緩慢沉降。

(4)選擇淋洗劑：可采用薄層色譜的方法選出理想的淋洗液。選擇原則：分離極性強的農(nóng)藥，選用吸附能力較弱的吸附劑和極性較強的溶劑作淋洗液；分離極性弱的農(nóng)藥，宜選用吸附能力較強的吸附劑和極性較弱的溶劑作淋洗液；在單一溶劑作為淋洗液不理想時，可加入一些極性更強或更弱的溶劑來調(diào)節(jié)淋洗液的極性，以達到最佳分離效果。

(5)洗柱：添加淋洗液，除去層析柱中的殘留空氣，使柱更緊密均勻，保持柱頂不干。

(6)加樣：待洗柱時的淋洗液離柱填料平面1mm左右，加入待分離的組分。滴加淋洗液，流速為每秒l滴，或每4s1滴。在操作過程中，防止柱頂端進人空氣，不要讓柱填料裸露在空氣中。

(7)洗脫：根據(jù)分離情況，切割收集各組分，進行鑒定，找到純度高的餾分，然后蒸餾干燥得到農(nóng)藥純品。

柱層析適用于殺草丹、丁草胺、2，4-滴丁酯等農(nóng)藥品種的純化。

(四)區(qū)熔提純法(區(qū)域熔融法)

區(qū)熔提純法是根據(jù)被提純農(nóng)藥中各組分在相變中重分布的原理來得到較純組分的提純方法。雜質(zhì)一般使純物質(zhì)的熔點降低，隨著熔區(qū)的移動，能使雜質(zhì)一起移動，而富集于一端，純物質(zhì)則向相反的方向移動而富集于另一端。該方法設備簡單，提純效率高，操作可自動化，應用范圍廣。一般操作先臥式提純6次，再立式提純1次。本方法適用于六六六4種異構體等農(nóng)藥的提純。

(五)升華法

所謂升華就是指物質(zhì)不經(jīng)過液態(tài)而直接從固態(tài)轉(zhuǎn)變?yōu)闅鈶B(tài)的現(xiàn)象，這樣的農(nóng)藥必須具有相當高的蒸氣壓。升華法有常壓和減壓兩種方法?？梢陨A的農(nóng)藥品種有：硫黃、六六六、氯化乙基汞、磷化鋁等。升華法在農(nóng)藥純品制備中應用較少。

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