2.9油茶葉提取物的化學(xué)成分分析

由上述結(jié)果可知油茶葉提取物中的多酚與黃酮可能是抑制5α-R的重要物質(zhì)基礎(chǔ)，采用UPLC-TripleTOF-MS/MS對(duì)COLE中的酚類(lèi)化合物進(jìn)行定性分析，結(jié)果在COLE中中共發(fā)現(xiàn)22種酚類(lèi)化合物。圖8為負(fù)離子模式下的總離子圖，表4為COLE中酚類(lèi)化合物鑒定結(jié)果。RichardA.等研究證明蘆?。↖C50>100μmol/L）、槲皮素（IC50=23μmol/L）具有I型5α-R抑制活性。另外還發(fā)現(xiàn)兒茶素等茶多酚類(lèi)物質(zhì)，在無(wú)細(xì)胞狀態(tài)下顯示出有效的5α-R抑制作用，但在5α-R的全細(xì)胞分析中抑制作用不明顯。周琛媛等在具有高5α-R抑制活性的油茶蒲聚酰胺組Fr8中分離純化（采用固相萃取的方式），通過(guò)質(zhì)譜和核磁共振的手段進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定出F1為3-O-沒(méi)食子酰基-4,6,--α/β-D-吡喃葡萄糖（GeminD），F(xiàn)4為3,4,6-3-O-沒(méi)食子?；?α/β-D-吡喃葡萄糖（GAG）。這些物質(zhì)均在COLE中被發(fā)現(xiàn)，它們是COLE發(fā)揮5α-R抑制活性的物質(zhì)基礎(chǔ)。

3結(jié)論

本研究以5α-R為研究靶點(diǎn)建立酶促反應(yīng)體系，通過(guò)確定粗酶提取物、NADPH、T的適宜添加濃度優(yōu)化該體系，確定反應(yīng)體系如下：PBS緩沖液（pH7.4）300μL，0.76mg/mL的粗酶提取物500μL，2mmol/L的T50μL，樣品50μL，2mmol/L的NADPH100μL，37℃下反應(yīng)30min。按照該體系用HPLC法測(cè)量臨床上使用的I型5α-R抑制劑度他雄胺的5α-R抑制活性，結(jié)果測(cè)得其IC50為6.24nmol/L證實(shí)該法可靠有效。通過(guò)重復(fù)性試驗(yàn)證實(shí)該反應(yīng)體系具有穩(wěn)定性。然后用該法進(jìn)一步測(cè)定、比較不同油茶葉提取物5α-R抑制活性，其中50%乙醇油茶葉提取物的5α-R抑制活性最高（IC50=259.56μg/mL），證明50%乙醇油茶葉提取物是潛在的植物來(lái)源的5α-R抑制劑。最后采用UPLC-TripleTOF-MS/MS對(duì)油茶葉提取物中的化學(xué)成分進(jìn)行了分析鑒定，結(jié)果共發(fā)現(xiàn)22種酚類(lèi)化合物，其中槲皮素、蘆丁、兒茶素、3-O-沒(méi)食子?；?4,6,--α/β-D-吡喃葡萄糖（GeminD），3,4,6-3-O-沒(méi)食子?；?α/β-D-吡喃葡萄糖可能是COLE發(fā)揮5α-R抑制活性的物質(zhì)基礎(chǔ)。因此本研究證明了油茶葉提取物是天然的5α-R抑制劑，在治療雄性激素依賴型疾病方面具有良好的應(yīng)用前景。

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