除了色譜柱填料粒度直徑為亞2 pm外，還有采用的進(jìn)樣器與檢測(cè)器與高效液相色譜的也有所不同。選擇最高精度和最低擴(kuò)散的固定環(huán)進(jìn)樣器(SM-FL)或者選擇高回收率、高精度、寬線性動(dòng)態(tài)范圍的流通針式進(jìn)樣器(SM—FTN)。雙通道紫外檢測(cè)器或二極管陣列檢測(cè)器為高速檢測(cè)器，采樣速率高，能準(zhǔn)確積分快速流出的組分。

六、高效液相色譜儀的日常維護(hù)

高效液相色譜儀需要日常精心的維護(hù)和保養(yǎng)，以便儀器處于正常的工作狀態(tài)，延長(zhǎng)儀器、色譜柱的使用壽命，保證分析數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確可靠。

(一)高壓泵的日常維護(hù)

長(zhǎng)色譜柱或使用了很長(zhǎng)一段時(shí)間的色譜柱，或加大流動(dòng)相的流速，柱壓會(huì)明顯提高，高壓泵的噪聲也會(huì)加大，這屬于正?，F(xiàn)象。高壓泵的高壓限制自動(dòng)保護(hù)值不要設(shè)置太高，高效相色譜儀日常分析為20～30 MPa。當(dāng)超壓報(bào)警，高壓泵停止泵液時(shí)，要逐級(jí)拆開(kāi)管路，找出堵塞處排除后，再?gòu)?fù)位工作。每次超壓都會(huì)對(duì)泵封帶來(lái)影響，有可能會(huì)導(dǎo)致基線噪聲加大。在維修高壓泵時(shí)要特別小心，防止固體顆粒進(jìn)入泵體，劃傷密封墊、閥球、座和柱塞。防止折斷柱塞桿。如果高壓泵工作時(shí)，壓力顯示波動(dòng)大于5%，通常提示需要停泵排氣泡或清洗單向閥或應(yīng)更換密封墊。

(二)對(duì)流動(dòng)相的要求

所用的流動(dòng)相和樣品溶液必須經(jīng)過(guò)0.45 μm或0.2μm的濾膜過(guò)濾才能上機(jī)使用。即使過(guò)濾后在分析柱前也要加裝保護(hù)柱或過(guò)濾器。流動(dòng)相所用的水必須新鮮，可以用超純水制備儀或自行蒸餾，水質(zhì)應(yīng)符合《分析實(shí)驗(yàn)室用水國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)》(GB／T 6682--2008)規(guī)定的實(shí)驗(yàn)室一級(jí)水規(guī)格。通常的做法是對(duì)電熱蒸餾水再用全套玻璃蒸餾器重蒸餾一次。要注意用超聲波清洗器定期在稀硝酸或甲醇中清洗過(guò)濾頭，過(guò)濾頭不通暢容易導(dǎo)致進(jìn)入高壓泵的流動(dòng)相在管線中產(chǎn)生氣泡。流動(dòng)相在一定pH下操作時(shí)，要注意空氣中CO₂溶解在流動(dòng)相內(nèi)對(duì)pH變化的影響。更換流動(dòng)相時(shí)，如果兩種流動(dòng)相互不相溶，需采用過(guò)渡溶劑(如異丙醇等)將前一種流動(dòng)相逐步溶解徹底洗脫后才能換流動(dòng)相。

(三)進(jìn)樣系統(tǒng)的維護(hù)

使用指定的進(jìn)樣器，防止進(jìn)樣器針頭劃傷閥體。在農(nóng)藥殘留分析周期內(nèi)，不要進(jìn)行有干擾的常量分析。必要時(shí)要用乙腈、甲醇、水等反復(fù)清洗進(jìn)樣口。空走或進(jìn)樣溶劑確認(rèn)進(jìn)樣口的潔凈狀態(tài)。

(四)色譜柱的日常維護(hù)

每次開(kāi)機(jī)時(shí)，流量要逐漸增加或降低，避免突然增壓或降壓，使柱床受到?jīng)_擊，產(chǎn)生空隙。不要接反柱頭或其他連接擰得太緊，不漏液即可，如果擰得過(guò)緊易損壞接頭螺紋。要注意使用的色譜柱pH范圍，超出使用范圍、超室溫使用、樣品凈化差、超壓沖擊都會(huì)縮短色譜柱的使用壽命。在使用緩沖溶液作流動(dòng)相時(shí)，更換乙腈或甲醇前，一定要用水將鹽沖洗干凈，否則鹽沉積可能導(dǎo)致色譜柱徹底堵塞報(bào)廢。高效液相色譜柱與氣相色譜毛細(xì)管柱不同，保護(hù)再好也有一定的使用壽命。毛細(xì)管柱在防止干燒的情況下，可以有很長(zhǎng)的壽命。液相色譜柱的壽命與流動(dòng)相種類及處理、色譜儀操作的流量和壓力、樣品的凈化處理有關(guān)。色譜柱是否報(bào)廢，主要取決于對(duì)樣品的分離度和在一定流量下的柱壓。不要試圖擰開(kāi)色譜柱管，這樣重新擰上會(huì)導(dǎo)致柱效顯著下降，色譜柱提前報(bào)廢。色譜柱經(jīng)過(guò)反沖、清洗和再生往往很難使柱效恢復(fù)。色譜柱中的填料隨溫度升降產(chǎn)生膨脹和收縮，在某些情況下，溫度突然變化會(huì)損壞柱床，因此使用時(shí)溫度要逐漸升高，實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)色譜柱慢慢降到室溫再停泵。每次實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，反相色譜操作方式要用l00%乙腈或甲醇沖洗色譜柱20 min以上才能關(guān)機(jī)。拆卸后的色譜柱兩端用盲頭螺絲擰緊，防止封存的溶劑揮發(fā)。反相填料通常要用乙腈或甲醇，正相鍵合相用2，2，4-三甲基戊烷或按照色譜柱使用和維護(hù)指南要求封存保管。

(五)儀器組件連接和管路選擇

使用的管路長(zhǎng)度越短，內(nèi)徑越細(xì)，色譜峰形越窄?，F(xiàn)在高效液相色譜普遍使用PEEK材料(最高耐壓40 MPa)管路和接頭，突出的優(yōu)點(diǎn)是不需要?jiǎng)佑冒馐?，用手?jǐn)Q緊就可以達(dá)到不漏液的效果，并且對(duì)有些化合物分析會(huì)獲得滿意色譜峰形。

(六)工作站的維護(hù)和升級(jí)

配備色譜工作站的液相色譜儀，通常由儀器生產(chǎn)廠商專門開(kāi)發(fā)的軟件操作系統(tǒng)來(lái)控制儀器的工作狀態(tài)和數(shù)據(jù)處理。在安裝和使用這類軟件時(shí)要注意適用的計(jì)算機(jī)操作系統(tǒng)的版本和語(yǔ)言，對(duì)計(jì)算機(jī)的硬件設(shè)備要安裝驅(qū)動(dòng)軟件，使之正常工作，否則可能導(dǎo)致計(jì)算機(jī)經(jīng)常死機(jī)、亂碼，影響正常的分析工作。要對(duì)原機(jī)器帶來(lái)的軟件進(jìn)行拷貝或妥善存檔。高效液相色譜儀工作站版本升級(jí)通常要付費(fèi)。高效液相色譜儀的操作人員要具備計(jì)算機(jī)的知識(shí)并能熟練操作，能解決實(shí)際分析工作中遇到的問(wèn)題。對(duì)于不具備這方面能力的人要進(jìn)行培訓(xùn)，非工作人員不可隨便啟動(dòng)計(jì)算機(jī)和液相色譜儀。為了和外界通信(網(wǎng)絡(luò)連接或收發(fā)電子郵件等)，有的計(jì)算機(jī)必須安裝使用雙網(wǎng)卡。登錄因特網(wǎng)后可能導(dǎo)致產(chǎn)生儀器主機(jī)無(wú)法與計(jì)算機(jī)工作站連接的問(wèn)題。解決這個(gè)問(wèn)題可以嘗試有些殺病毒軟件帶的LSP修復(fù)工具。但有些實(shí)驗(yàn)室為了安全、管理的需要，可能不允許使用或安裝雙網(wǎng)卡。

七、高效液相色譜法的定性分析與定量分析

在定性分析方面，除采用與標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的相對(duì)保留時(shí)間比對(duì)外，還可以利用檢測(cè)器的選擇性、紫外檢測(cè)器全波長(zhǎng)掃描功能、改變流動(dòng)相組成時(shí)農(nóng)藥的保留值變化規(guī)律進(jìn)行定性分析。在農(nóng)藥殘留分析上通常采用外標(biāo)法進(jìn)行定量分析，較少采用內(nèi)標(biāo)法。在農(nóng)藥原藥和制劑定量分析上，當(dāng)對(duì)分析準(zhǔn)確度和精密度有較高要求時(shí)，可采用內(nèi)標(biāo)法分析。內(nèi)標(biāo)物通常選用農(nóng)藥殘留標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定的內(nèi)標(biāo)物或鄰苯二甲酸酯類同系物。除非是建立方法研究，日常依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)的檢測(cè)分析只采用單點(diǎn)校正或兩個(gè)濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液建標(biāo)進(jìn)行測(cè)定。

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