（4）流速的選擇

流速的改變會影響梯度洗脫時間和分離效果。試驗考察了0.10～0.60mL/min范圍間10種目標化合物的分離效果。當流速大于0.2mL/min時，出峰時間提前，容易造成各目標物之間分離度和峰型都不理想。當流速小于0.15mL/min時，延長了目標物出峰時間，降低了工作效率。所以，本試驗選用0.15mL/min作為方法最佳流速。

（5）梯度洗脫程序的選擇

試驗分析了流動相中甲醇初始比例對分離度的影響。當甲醇比例大20％時，前4種目標化合物出峰較快，但色譜峰響應值低，易出現(xiàn)色譜峰重疊現(xiàn)象；當甲醇比例小于20％時，各目標物出峰時間延長，并且峰形差，所以選擇甲醇的初始比例為20％，0.02mmol/L乙酸銨的初始比例為80％。梯度洗脫程序運行到10min時，甲醇比例再重新回到20％，目的是穩(wěn)定基線，方便下一個目標物實現(xiàn)更好的分離。

（6）柱溫的選擇

本試驗考察了柱溫在20℃～50℃范圍間的檢測結(jié)果，當T＜30℃時，各組分分離效果較差1當T＞30℃時，柱效降低。因此，選擇30℃為最佳檢測柱溫溫度。

在優(yōu)化的實驗條件下，10種食品添加劑在10min內(nèi)能滿足快速分離的需要，且分離度與靈敏度都較好。標準色譜圖見圖4。

三、標準曲線、檢出限及精密度測定

1、標準曲線、檢出限的測定

按優(yōu)化好的試驗條件對10種食品添加劑混合標準溶液系列進行色譜分析，以各組分的峰面積為縱坐標，質(zhì)量濃度為橫坐標，并繪制標準曲線。結(jié)果表明，在0.050～50.0μg/mL范圍內(nèi)，10種食品添加劑的質(zhì)量濃度與峰面積呈良好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)R2均大于0.999，以3倍信噪比(3S/N)計算方法檢出限，方法檢出限介于0.0017～0.0034μg/mL之間。標準曲線、相關(guān)系數(shù)、檢出限及線性范圍見表2。

2、精密度試驗

本試驗分別對5.0μg/mL、10.0μg/mL和40.0μg/mL三組濃度的混合標準溶液進行7次平行測定。如表3所示，測定低、中、高三組濃度的相對標準偏差(RSD)范圍在0.69％～2.8％之間，表明本試驗精密度良好。
 

四、樣品前處理及樣品分析

取10g飲料樣品(精確稱量至0.001g)于50mL具塞離心管中，加適量水，超聲15min，用水定容至刻度，經(jīng)高速離心機(4000r/min)離心10min，再用0.22μm微孔濾膜過濾，濾液供UPLC測定。

在樣品上進行5.1μg/mL加標回收率試驗，每組進行6次平行測定，并與傳統(tǒng)液相色譜法進行對照分析，如表4所示，UPLC檢測的各組分樣品回收率在97.9％～101.1％之間，所有目標物的相對標準偏差均小于5.0％，且兩種方法所得到的結(jié)果有良好的一致性。

五、結(jié)論

本方法采用超高效液相色譜法測定飲料中10種食品添加劑，在優(yōu)化后的試驗條件下，各組分在10min內(nèi)可達到完全分離，且具有良好的線性關(guān)系，檢出限為0.0017～0.0034μg/mL，樣品加標回收率為97.9％～101.1％。此方法與傳統(tǒng)液相色譜法相比，可大大縮短測定的分析時間，有效提高了檢測效率，具有現(xiàn)實指導意義，為應用于食品中添加劑的檢測奠定了基礎。

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