北方偉業(yè)計量集團有限公司
培養(yǎng)基 | OP9細胞專用培養(yǎng)基:80%MEMα+20%FBS |
傳代方法 | 復(fù)蘇步驟:①凍存管從液氮或-80℃冰箱中取出放入PE手套中,迅速沒入37℃水浴鍋,搖晃凍存管加速溶解,以1min內(nèi)全部溶解為宜;②在超凈臺中將溶解好的細胞液加入到裝有9mL完全培養(yǎng)基的離心管內(nèi),1000-1200rpm離心5min,棄去上清液,用1-2mL完全培養(yǎng)基重懸細胞。③將細胞懸液加入到含有5-6mL完全培養(yǎng)基的T25瓶中,放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)。 細胞傳代:①將舊培養(yǎng)液吸除,PBS清洗兩遍后,加入1-2mL胰酶(0.25%Trypsin+0.02%EDTA);②鏡下觀察消化情況,在細胞邊緣縮小,貼壁松動時(可用吸管吸起些許胰酶輕輕吹打細胞層某處,肉眼可見細胞層脫落,即消化完成,否則繼續(xù)消化),直接吸掉胰酶,加入5-6mL完全培養(yǎng)基,輕輕吹打細胞層,把細胞層吹落,吹散。③將細胞懸液按1:2比例分到新的T25瓶中,添加適當?shù)耐耆囵B(yǎng)基,把細胞懸液打勻,于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。;④注意培養(yǎng)基pH值變化和細胞密度,定期換液(每周2-3次),待細胞密度達到80%-90%時,重復(fù)傳代操作或者凍存。 |
生長條件 | 培養(yǎng)溫度37℃;氣體環(huán)境5%CO2+95%空氣; |
生長特性 | 貼壁生長 |
存儲條件 | 液氮 |
安全等級 | 1 |
形態(tài) | 成纖維細胞樣,長梭形,邊緣不規(guī)則,單層貼壁生長,背景干凈,不產(chǎn)色素,無空泡 |
分離基物 | 骨髓,基質(zhì) |
應(yīng)用領(lǐng)域 | OP9細胞株源自新生的op/op 小鼠顱蓋。因編碼M-CSF的基因中的一個突變,它不能生成有功能的巨噬細胞克隆刺激因子(M-CSF)。M-CSF的存在對胚胎干細胞(ES)分化成血細胞而不是其他巨噬細胞有抑制功能。 OP9細胞可以用于與小鼠胚胎干細胞共培養(yǎng)以誘導(dǎo)胚胎干細胞分化成成紅血球來源的、骨髓來源的和B細胞譜系的血細胞。與OP9共培養(yǎng)不需要外源的生長因子或復(fù)雜的胚胎結(jié)構(gòu)。這個系統(tǒng)對研究造血細胞的發(fā)育和分化的分子機理有用。 |
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