2.5.3 供試品溶液的制備

取雞血藤粉末（過40目篩）1.0 g，精密稱定，加甲醇60 m L，靜置30 min后超聲50 min；濾過，蒸干，殘?jiān)?0 m L蒸餾水溶解，轉(zhuǎn)置分液漏斗中，分別加乙酸乙酯20 m L，萃取3次；合并乙酸乙酯液，減壓回收至干。再加少許50%甲醇溶解，定容至10 m L量瓶，搖勻，過0.45μm微孔濾膜，即得。

2.5.4 精密度試驗(yàn)

精密吸取10μL同一份雞血藤藥材供試品溶液，連續(xù)進(jìn)樣5次，各共有峰相對(duì)峰面積和相對(duì)保留時(shí)間的RSD分別小于5%和0.6%，表明儀器精密度良好。

2.5.5 重復(fù)性試驗(yàn)

精密稱取雞血藤藥材粉末5份，制備供試品溶液。分別進(jìn)樣10μL，測(cè)得供試品溶液各共有峰相對(duì)峰面積和相對(duì)保留時(shí)間的RSD分別小于5%和0.6%，表明重復(fù)性良好。

2.5.6 穩(wěn)定性試驗(yàn)

精密吸取同一份雞血藤藥材，制備供試品溶液，分別在0、2、4、6、8、24 h時(shí)進(jìn)樣10μL，測(cè)得供試品溶液各共有峰相對(duì)峰面積和相對(duì)保留時(shí)間的RSD分別小于5%和1%，表明樣品溶液在24 h的穩(wěn)定。

2.5.7 共有模式的建立

將供試品溶液按選定的色譜條件測(cè)定，得到17個(gè)樣品的圖譜，根據(jù)國(guó)家藥典委員會(huì)頒布的“中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)軟件”（2010年版），以編號(hào)S1為參照?qǐng)D譜，生成對(duì)照?qǐng)D譜（見圖5）及樣品疊加圖譜（見圖6）。

2.5.8 共有峰的標(biāo)定

按選定的色譜條件分別將對(duì)照品及供試品進(jìn)樣分析，記錄色譜圖。采用國(guó)家藥典委員會(huì)頒布的“中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)軟件”（2010年版）處理圖譜，得供試品溶液共有模式圖，并計(jì)算同一植株不同環(huán)紋數(shù)樣品間相似度（見表6～表8），其中共有模式上保留時(shí)間及色譜峰相對(duì)穩(wěn)定的峰中，原兒茶酸、兒茶素、表兒茶素、大豆苷元、染料木素、異甘草素、芒柄花素可明確被指認(rèn)出。

2.5.9不同環(huán)紋數(shù)藤莖部位的雞血藤相似度評(píng)價(jià)

由圖6及表6～表8可以看出，不同環(huán)紋數(shù)藤莖部位的雞血藤相似度均較高，其中具1個(gè)樹脂環(huán)的樣品與其他樣品間相似度相對(duì)較低，除梅州具1個(gè)樹脂環(huán)的樣品相似度為0.853，其它同一植株不同樹脂環(huán)紋數(shù)樣品均在0.9以上，表明同一植株不同樹脂環(huán)紋數(shù)樣品所含化學(xué)組分相近。

3 討論

由圖2可以看出，梅州居群雞血藤樣品染料木素、芒柄花素在1環(huán)到2環(huán)樣品中含量大幅度下降，之后含量變化平緩（7環(huán)之后有輕微的上升趨勢(shì)），出現(xiàn)這一現(xiàn)象的原因可能是染料木素、芒柄花素為植物雌激素類成分，它們可能在植物幼苗期含量較高，在植物發(fā)育至一定程度時(shí)不再大量累積。而從化居群樣品并沒有這個(gè)趨勢(shì)，可能的原因?yàn)椴蓸訒r(shí)，梅州居群雞血藤1、2環(huán)藥材均粗于從化流溪河居群樣品，其樹脂環(huán)較寬，新鮮樹脂的顏色較后者更濃，而從化居群的雞血藤1、2環(huán)樣品栓皮部還帶有明顯的綠色，樹脂環(huán)較細(xì)；梅州居群與從化、惠州2個(gè)居群雞血藤各化學(xué)成分變化趨勢(shì)有著較大的差異，可能原因是環(huán)數(shù)原因，惠州居群樣品偏心性環(huán)紋數(shù)相對(duì)較多，且新鮮時(shí)樹脂顏色鮮紅。因此，筆者認(rèn)為，不同居群來源雞血藤樣品中次生代謝物質(zhì)動(dòng)態(tài)變化特征的不一致性，可能與其植株采集時(shí)的生長(zhǎng)狀況有關(guān)，尤其是與藤莖斷面的樹脂環(huán)紋的形成有關(guān)，如木質(zhì)部與韌皮部之間的間距大小、樹脂的多少與色澤的深淺等，而不同居群樣品的上述性狀特征均具有一定的差異性。由圖6可以看出，同一居群不同環(huán)紋數(shù)的雞血藤樣品在成分的種類上并沒有太大的變化，主要是含量的變化?，F(xiàn)有大量研究表明，影響植株生長(zhǎng)狀況及體內(nèi)次生代謝物質(zhì)積累變化的因素有可能是多種因子綜合作用或某一個(gè)或者幾個(gè)因子發(fā)揮著主導(dǎo)作用，如外環(huán)境中的氣候條件（水分、光照強(qiáng)度、溫濕度等）、地形地勢(shì)及土壤環(huán)境等和內(nèi)在因素（遺傳因子等），因此，很有必要進(jìn)一步對(duì)雞血藤藥材品質(zhì)形成的影響因素進(jìn)行深入系統(tǒng)的研究。

針對(duì)選擇具有幾個(gè)樹脂環(huán)紋數(shù)的雞血藤藤莖入藥的問題，本研究選取同一植株同一條藤莖具有不同環(huán)紋數(shù)部位的樣品進(jìn)行了藥材質(zhì)量的綜合分析比較，以探討樹脂環(huán)紋數(shù)對(duì)雞血藤質(zhì)量的影響。含量測(cè)定結(jié)果顯示，雞血藤中醇溶性浸出物、指標(biāo)性成分兒茶素、表兒茶素、原兒茶酸、芒柄花素及染料木素的含量在同一植株不同樹脂環(huán)紋數(shù)樣品中的變化趨勢(shì)各不相同，且不同植株中的變化趨勢(shì)也不相同；各測(cè)定指標(biāo)的含量在不同樹脂環(huán)紋樣品中的變化較為波動(dòng)，3～5環(huán)的樣品中醇溶性浸出物均高于或明顯高于具1個(gè)樹脂環(huán)紋的樣品，兒茶素及表兒茶素的含量在不同環(huán)紋數(shù)樣品中的波動(dòng)較大，但以1個(gè)樹脂環(huán)紋的為最低。HPLC指紋圖譜研究結(jié)果顯示，1個(gè)樹脂環(huán)紋的樣品與2環(huán)以上的樣品的相似度較低，表明雞血藤藥材以3環(huán)及以上為宜。

Spearman相關(guān)性分析表明雞血藤斷面的樹脂紋環(huán)數(shù)與各指標(biāo)成分均無明顯的相關(guān)性，故雞血藤環(huán)紋數(shù)不能單純作為評(píng)價(jià)其藥材質(zhì)量好壞的標(biāo)準(zhǔn)。據(jù)本實(shí)驗(yàn)結(jié)果，認(rèn)為現(xiàn)行《中國(guó)藥典》雞血藤項(xiàng)下性狀鑒別中未提及樹脂環(huán)紋數(shù)是合理的，建議結(jié)合醇溶性浸出物及指標(biāo)性成分（兒茶素、表兒茶素）的含量來綜合評(píng)判。而梅余琪等采用主成分分析方法對(duì)韌皮部不同環(huán)紋數(shù)的雞血藤藥材進(jìn)行評(píng)價(jià)，發(fā)現(xiàn)韌皮部環(huán)紋數(shù)與多指標(biāo)成分含量具有一定正相關(guān)性，與本實(shí)驗(yàn)結(jié)果有所不同，可能與所選擇的化學(xué)成分的種類及分析方法有關(guān)。而雞血藤斷面的樹脂紋環(huán)數(shù)與其化學(xué)成分是否相關(guān)，尚有待進(jìn)一步分析研究。

由于雞血藤為多年生植物，其終年不落葉，藤莖的粗細(xì)與其斷面含樹脂的偏心性環(huán)紋數(shù)不具一定的相關(guān)性，從藤莖的性狀特征無法判斷其生長(zhǎng)的年限，故同一居群的不同植株雞血藤的生長(zhǎng)年限難以準(zhǔn)確判斷。且生長(zhǎng)年限不同，次生代謝產(chǎn)物的累積也不同，故本實(shí)驗(yàn)選取雞血藤同一植株作為實(shí)驗(yàn)樣本。但本實(shí)驗(yàn)由于雞血藤采樣的居群的數(shù)量較少，后續(xù)應(yīng)采集更多的居群樣品進(jìn)一步深入研究。

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