建立水稻中二氯喹啉酸及其代謝物二氯喹啉酸甲酯殘留的QuEChERS-HPLC-MS/MS分析方法，將該方法運(yùn)用到不同地區(qū)水稻樣品的檢測(cè)。

二氯喹啉酸和二氯喹啉酸甲酯分別經(jīng)甲醇和乙腈提取，C18、PSA和GCB凈化，C18色譜柱分離，電噴霧離子源（ESI+），多反應(yīng)監(jiān)測(cè)模式（MRM）下分析。在0.05、0.1、1mg/kg質(zhì)量分?jǐn)?shù)添加水平下，二氯喹啉酸平均添加回收率為83%～96%,RSD為0.4%～8.7%。在0.01、0.1、1mg/kg添加水平下，二氯喹啉酸甲酯平均添加回收率為79%～106%,RSD為0.2%～14.4%。

通過檢測(cè)1年12地的水稻樣品，二氯喹啉酸在水稻中的殘留量為0.05～0.48mg/kg，二氯喹啉酸甲酯的殘留量均小于0.01mg/kg，低于國家標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定的二氯喹啉酸在水稻上的最大殘留限量（1mg/kg）。該方法簡(jiǎn)單快速準(zhǔn)確，適合于水稻中二氯喹啉酸及其代謝物二氯喹啉酸甲酯的殘留檢測(cè)。

二氯喹啉酸（quinclorac）是喹啉羧酸類激素型特效選擇性除草劑，屬于典型的長殘留農(nóng)藥，在植物體內(nèi)、土壤和水中都有殘留，施藥后殘效期長，影響了后茬作物的生長，對(duì)部分作物有致畸作用。水稻作為世界上最重要的糧食作物之一，是世界一半以上人口的主食，且二氯喹啉酸是中國水稻使用量排名前十的除草劑，所以水稻中二氯喹啉酸的殘留問題得到人們的日益重視。

美國、歐盟和日本規(guī)定二氯喹啉酸在水稻上的最大殘留限量（MRL）為5mg/kg，我國規(guī)定二氯喹啉酸在水稻上的MRL值為1mg/kg，并未規(guī)定其代謝物的殘留限量。目前針對(duì)二氯喹啉酸代謝途徑的研究很少，在對(duì)于微生物降解研究中發(fā)現(xiàn)分枝桿菌（Mycobacteriumsp.）F4通過脫氯的方式或羧基甲基化可以產(chǎn)生甲酯化合物，二氯喹啉酸甲酯（quincloracmethylester）作為二氯喹啉酸在植物體內(nèi)的代謝產(chǎn)物毒性略低于母體[二氯喹啉酸LD50=2680mg/kgb.w.（鼠急性經(jīng)口），二氯喹啉酸甲酯LD50>2000mg/kgb.w.（鼠急性經(jīng)口）]，但由于二氯喹啉酸甲酯在植物體內(nèi)可以轉(zhuǎn)化為二氯喹啉酸，所以二氯喹啉酸代謝物的殘留檢測(cè)問題不容忽視。結(jié)構(gòu)式見圖1。

目前檢測(cè)二氯喹啉酸的方法有液相色譜法、氣相色譜法和液質(zhì)聯(lián)用法。黃思琦等建立的液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定模擬自然條件下稻田環(huán)境中的水、土壤和水稻植株中二氯喹啉酸的殘留，采用酸化乙腈作為提取溶劑，分散固相萃取凈化，操作簡(jiǎn)單，靈敏度高，但并未關(guān)注代謝物二氯喹啉酸甲酯的殘留檢測(cè)；關(guān)于二氯喹啉酸及其代謝物的檢測(cè)方法，王一茹等利用氣相色譜的方法同時(shí)檢測(cè)了二氯喹啉酸和代謝物二氯喹啉酸甲酯的殘留，但采用了甲基化試劑（重氮甲烷）轉(zhuǎn)化為甲酯進(jìn)行檢測(cè)，該方法前處理復(fù)雜，溶劑用量大，分析時(shí)間長。

QuEChERS前處理方法是相較于傳統(tǒng)前處理方法更節(jié)省溶劑、回收率高、處理時(shí)間短，近年來常用的前處理技術(shù)，可以有效的縮短凈化時(shí)間，減少凈化劑的使用，節(jié)省試驗(yàn)成本。本試驗(yàn)旨在建立一種QuEChERS-高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法，可同時(shí)檢測(cè)水稻中的二氯喹啉酸及其代謝物的殘留，優(yōu)化檢測(cè)方法，節(jié)約成本，提高前處理的效率。并運(yùn)用到1年12地田間試驗(yàn)樣品，分析二氯喹啉酸及其代謝物在不同地區(qū)水稻中的殘留，驗(yàn)證該方法的實(shí)用性。

1材料與方法

1.1試驗(yàn)材料

99.2%二氯喹啉酸標(biāo)準(zhǔn)品，99.0%二氯喹啉酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)品，十八烷基硅烷鍵合膠（C18）、N-丙基乙二基（PSA）、石墨化碳黑（GCB）、色譜純乙腈、甲醇和甲酸，分析純無水硫酸鎂和氯化鈉，50%二氯喹啉酸可溶粉劑。

1.2儀器設(shè)備

Agilent1290-6460液相色譜串聯(lián)三重四級(jí)桿質(zhì)譜儀和MassHunter工作站軟件，超純水儀，萬分之一天平，渦旋振蕩器，SL-200型高速多功能粉碎機(jī)，高速冷凍離心機(jī)，LTJM-2099型精米機(jī)。

1.3最終殘留田間試驗(yàn)設(shè)計(jì)

最終殘留田間試驗(yàn)于2018年在黑龍江、遼寧、安徽、江蘇等12地進(jìn)行，試驗(yàn)地信息見表1。按農(nóng)作物中農(nóng)藥殘留試驗(yàn)準(zhǔn)則要求設(shè)試驗(yàn)小區(qū)，試驗(yàn)設(shè)置1個(gè)處理小區(qū)和1個(gè)對(duì)照小區(qū)。每個(gè)小區(qū)面積不小于100m2，小區(qū)之間設(shè)置保護(hù)行，每個(gè)處理重復(fù)3次。

試驗(yàn)區(qū)：以田間推薦最高施藥劑量375ga.i./hm2（制劑用藥量750g/hm2），水稻移栽后7～15d，稗草2～3葉期，莖葉噴霧，施藥1次。水稻收獲時(shí)采集水稻植株和稻穗樣品約1kg,（-20±2）℃下保存，待測(cè)。

對(duì)照區(qū)：設(shè)置不施藥空白對(duì)照區(qū)，噴施等量的清水，采集水稻植株和稻穗作為空白樣品。

1.4殘留分析方法

1.4.1樣品前處理

稻穗經(jīng)精米機(jī)脫殼分為糙米和稻殼2部分，稻稈植株剪為小段，分別用高速粉碎機(jī)粉碎。

二氯喹啉酸：準(zhǔn)確稱取5g粉碎樣品（糙米、稻殼和稻稈）于50mL離心管中，加入10mL甲醇，在1500r/min下振蕩5min，加入3g無水硫酸鎂、2g氯化鈉，渦旋1min，在4000r/min離心5min，取1.5mL上清液加入含有凈化劑（糙米：150mgMgSO4+50mgC18+50mgPSA，稻殼：150mgMgSO4+50mgPSA，稻稈：150mgMgSO4+20mgGCB+50mgPSA）的2mL離心管中，渦旋1min，在5000r/min離心5min，取上清液，經(jīng)0.22μm有機(jī)膜過濾，待HPLC-MS/MS分析。

二氯喹啉酸甲酯：準(zhǔn)確稱取5g粉碎樣品（糙米、稻殼和稻稈）于50mL離心管中，加入5mL乙腈，然后在1500r/min下振蕩5min，加入3g無水硫酸鎂、2g氯化鈉，渦旋1min，在4000r/min離心5min，取1.5mL上清液加入含有凈化劑（糙米：150mgMgSO4+50mgC18+50mgPSA，稻殼：150mgMgSO4+50mgPSA，稻稈：150mgMgSO4+20mgGCB+50mgPSA）的2mL離心管中，渦旋1min，在5000r/min離心5min，取上清液，經(jīng)0.22μm有機(jī)膜過濾，待HPLC-MS/MS分析。

1.4.2HPLC-MS/MS檢測(cè)條件

色譜條件：AgilentEclipsePlusC18色譜柱（50mm×2.1mm,1.8μm）；柱溫40℃；進(jìn)樣體積1μL；流動(dòng)相A相為乙腈，B相為0.2%甲酸水溶液，梯度洗脫程序：0～1min為10%A,3.0min為90%A,4.0min為10%A，分析時(shí)間是4min，流速為0.3mL/min;80%甲醇水溶液洗針。

質(zhì)譜條件：電噴霧正離子源（ESI+）；多反應(yīng)監(jiān)測(cè)模式（MRM）；霧化氣為99.95%氮?dú)?，碰撞氣和干燥氣?9.99%氮?dú)?，干燥氣溫?25℃，流速8.0L/min；鞘氣溫度350℃，流速10.0L/min；毛細(xì)管電壓4.5kV；噴嘴電壓500V。二氯喹啉酸母離子為m/z242.0，定量和定性離子分別為m/z224.0和m/z161.0，二氯喹啉酸甲酯母離子為m/z256.1，定量和定性離子分別為m/z224.0和m/z161.1；駐留時(shí)間120ms；裂解電壓60V；碰撞能15eV。

1.4.3標(biāo)準(zhǔn)溶液配制及標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

分別準(zhǔn)確稱取二氯喹啉酸和二氯喹啉酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)品0.01g（精確至0.0001g），用色譜甲醇溶解并定容至100mL容量瓶中，配制成100mg/L標(biāo)準(zhǔn)溶液。二氯喹啉酸用色譜甲醇和基質(zhì)（糙米、稻殼和稻稈）空白對(duì)照液逐級(jí)稀釋成0.05、0.1、0.5、1、2、5mg/L系列標(biāo)準(zhǔn)溶液，二氯喹啉酸甲酯用色譜甲醇和基質(zhì)（糙米、稻殼和稻稈）空白對(duì)照液逐級(jí)稀釋成0.01、0.05、0.1、0.5、1、5mg/L系列標(biāo)準(zhǔn)溶液。現(xiàn)用現(xiàn)配，所有溶液均于4℃下避光保存。

采用外標(biāo)法定量，分別以2種化合物基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液的質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，監(jiān)測(cè)定量離子對(duì)的峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線。

1.4.4添加回收試驗(yàn)

在空白糙米、稻殼和稻稈基質(zhì)中分別添加二氯喹啉酸和二氯喹啉酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)溶液，二氯喹啉酸質(zhì)量分?jǐn)?shù)添加水平為0.05、0.1、1mg/kg，二氯喹啉酸甲酯質(zhì)量分?jǐn)?shù)添加水平為0.01、0.1、1mg/kg。每個(gè)水平重復(fù)5次。按照上述方法進(jìn)行樣品前處理和檢測(cè)。計(jì)算日內(nèi)平均回收率、日內(nèi)相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差和日間平均回收率、日間相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差。

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