在國標(biāo)GB5009.22—2016方法1：同位素稀釋液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法的基礎(chǔ)上進(jìn)行了方法優(yōu)化、改進(jìn)，建立了釀酒原料及白酒中黃曲霉毒素B1（AFTB1）的分析方法。樣品經(jīng)甲醇∶水（7∶3）提取后，凈化稀釋液由TritionX-100的PBS改為超純水，黏度變小、易于通過萃取小柱。流動相改為甲醇和0.02%甲酸-2mmol／L乙酸銨，提高了響應(yīng)強(qiáng)度。梯度洗脫，經(jīng)高效液相色譜分離，在ESI正離子模式下掃描，進(jìn)行多反應(yīng)監(jiān)測模式（MRM）檢測。

結(jié)果表明，儀器精密度良好，不同濃度標(biāo)液相對標(biāo)準(zhǔn)誤差（RSD%）均<6%；所繪制校準(zhǔn)曲線線性關(guān)系良好，0.05～10µg／L范圍內(nèi)相關(guān)系數(shù)r值>0.999；方法定量限為0.05µg／kg，檢出限<0.01μg／kg，均低于其他檢測方法。原料與白酒的加標(biāo)回收率都在90%～105%，完全符合要求。此方法檢出限低、準(zhǔn)確度高，加強(qiáng)了企業(yè)對AFTB1的嚴(yán)格監(jiān)控。

白酒釀造原料主要有高粱、大麥、小麥、豌豆等，因釀酒原料用量較大，酒廠一般對原料批量購買，進(jìn)行存儲使用，一旦購買原料存在安全隱患或存儲不當(dāng)造成霉變，將產(chǎn)生一些對人體有害的霉菌毒素類物質(zhì)，其中黃曲霉毒素B1（AFTB1）對人體健康的危害最大，為強(qiáng)毒性、強(qiáng)致癌性物質(zhì)，已被世界衛(wèi)生組織癌癥機(jī)構(gòu)（IARC）列入一級致癌物。

為了嚴(yán)格控制黃曲霉毒素對人體的危害風(fēng)險，從而保障消費者的安全，美國、日本、加拿大等多個國家已發(fā)布了有關(guān)黃曲霉毒素最大限定量的規(guī)定，我國GB2761—2017《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品中真菌毒素限量》標(biāo)準(zhǔn)中也規(guī)定了糧食中的真菌毒素B1的最大限量，鳳香型釀酒原料（高粱、大麥、小麥、豌豆）中的最大限量分別為10µg／kg、5µg／kg、5µg／kg、5µg／kg。盡管如此，但仍然存在一定的風(fēng)險，因此建立準(zhǔn)確、高效的檢測方法尤為重要。

目前對于黃曲霉毒素的檢測方法主要有液相色譜-熒光檢測法、酶聯(lián)免疫吸附篩查法、高光譜檢測法、薄層色譜法、同位素稀釋液質(zhì)聯(lián)用法等。本研究建立了釀酒原料及白酒中AFTB1的液質(zhì)聯(lián)用（HPLC-MS／MS）檢測法。該方法樣品前處理較簡單、檢測效率高、準(zhǔn)確度高、檢測限更低，進(jìn)一步滿足了消費者對食品安全更高的期望和國家對食品檢測更嚴(yán)的要求。

1材料與方法

1.1材料、試劑與儀器

樣品：原料（高粱、大麥、小麥），成品酒取自于陜西西鳳酒股份有限公司。

試劑：甲酸、乙腈、甲醇、乙酸銨（分析純）、超純水。

儀器設(shè)備：高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜儀，萬分天平，氮吹儀，免疫親和柱。

標(biāo)準(zhǔn)品：黃曲霉毒素B1（AFTB1純度≥98%），同位素內(nèi)標(biāo)13C17-AFTB1（純度≥98%）。

1.2標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

AFTB1標(biāo)準(zhǔn)儲備液：稱取AFTB1為1.0mg，用乙腈定容至100mL容量瓶，配制成10µg／mL標(biāo)準(zhǔn)儲備液。

同位素內(nèi)標(biāo)13C17-AFTB1工作液：準(zhǔn)確移取0.5µg／mL的13C17-AFTB10.8mL，用乙腈定容至10mL，配制成40ng／mL的同位素內(nèi)標(biāo)工作液。

AFTB1系列標(biāo)準(zhǔn)工作液：移取AFTB1標(biāo)準(zhǔn)儲備液1.0mL至100mL容量瓶中，用乙腈定容，配制成100ng／mL的AFTB1中間標(biāo)準(zhǔn)液。再分別移取AFTB1中間標(biāo)準(zhǔn)液5µL、10µL、50µL、100µL、200µL、500µL、800µL、1000µL至10mL容量瓶中，分別加500µL的40ng／mL同位素內(nèi)標(biāo)工作液，用初始流動相定容，配制成濃度為0.05ng／mL、0.1ng／mL、0.5ng／mL、1.0ng／mL、2.0ng／mL、5.0ng／mL、8.0ng／mL、10.0ng／mL的系列標(biāo)準(zhǔn)工作液，過0.22µm濾膜，待上機(jī)。

1.3儀器參數(shù)條件

液相條件：色譜柱：Shin-packXR-ODSIIIC18（2.0mmI.D*150mmL.，3.0μm）；進(jìn)樣量：10µL；流動相：A：0.02%甲酸-2mmol／L乙酸銨，B：甲醇；柱溫：40℃；流速：0.3mL／min；駐留時間：10ms。洗脫方式：梯度洗脫，見表1。

質(zhì)譜條件：掃描方式：多級反應(yīng)監(jiān)測（MRM）；離子源：ESI，正離子模式；加熱塊溫度：450℃；DL溫度：250℃；霧化氣流速：3.0L／min；干燥氣流速：15L／min；離子源接口電壓+4.5；駐留時間：10ms。

1.4試驗方法

1.4.1樣品提取

釀酒原料：準(zhǔn)確稱取釀酒原料5g樣品于50mL離心管中，加入250µL同位素內(nèi)標(biāo)工作液，旋渦振蕩混勻，加入20mL甲醇-水（70+30），渦旋混勻，靜置30min后用均質(zhì)器均質(zhì)3min，過玻璃纖維濾紙。準(zhǔn)確移取濾液4mL加入12mL的超純水，混合均勻，待凈化。

酒樣：稱取2g酒樣，加入100µL同位素內(nèi)標(biāo)工作液，加入4mL水，振蕩混勻，待凈化。

1.4.2凈化

原料：待免疫親和柱保護(hù)液流盡后加入上述溶液，以1滴／s的流速通過免疫親和柱，流完后用2×10mL超純水淋洗免疫親和柱，自然重力流干后擠干小柱，準(zhǔn)確加入2×0.5mL甲醇洗脫，再加1mL水?dāng)D干，收集于比色試管中，過0.22µm有機(jī)濾膜，待上機(jī)。

酒樣：待免疫親和柱保護(hù)液流盡后加入1.4.1中酒樣溶液，自然重力下滴，流完后加10mL去離子水淋洗柱子，擠干；加2×0.5mL甲醇洗脫，再加1mL水?dāng)D干，收集于比色試管中，過0.22µm有機(jī)濾膜，待上機(jī)。

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