2結(jié)果

2.1 YXST入血成分的鑒別

根據(jù)前期對YXST化學成分定性分析的結(jié)果，本研究對YXST灌胃給藥前后的大鼠血漿進行比對分析，通過提取母離子、比較保留時間和質(zhì)譜裂解規(guī)律，同時結(jié)合文獻和對照品信息，對YXST的入血成分進行了鑒別。給藥前后大鼠血漿在正負離子模式下的總離子流圖見圖1，從中共定性鑒別出26個原型成分，分別為葛根素、甘草苷、丹酚酸B、靈芝酸A、黃連堿、藥根堿等，具體信息見表1。

2.2靶點收集與YXST治療冠心病潛在靶點的篩選

通過檢索STITCH、TCMSP和Binding DB數(shù)據(jù)庫，收集得到19個入血成分對應的655個靶點，合并后共得287個成分靶點。根據(jù)TTD、DrugBank、PharmGKB、MalaCards和CTD數(shù)據(jù)庫，合并去重后共獲得199個冠心病相關(guān)的疾病靶點。并不是所有的入血成分靶點都能發(fā)揮特定藥效。因此，首先將287個成分靶點與199個疾病靶點進行關(guān)聯(lián)，篩選得到42個重疊的靶點，即為YXST治療冠心病的直接作用靶點，結(jié)果見圖2。此外，為進一步分析與疾病靶點存在間接作用的成分靶點，把成分靶點與疾病靶點導入STRING數(shù)據(jù)庫進行PPI分析，將獲得的數(shù)據(jù)利用Cytoscape進行可視化。其中，成分靶點與疾病靶點不能直接或間接與彼此相互作用的節(jié)點被去除。再利用Network Analyzer插件對該PPI網(wǎng)絡(luò)中所有節(jié)點的degree值進行分析，計算得平均degree為18.33。篩選degree大于平均degree 2倍的節(jié)點作為hub node，共有54個節(jié)點符合標準。在這些hub node中，有40個是成分靶點，26個是疾病靶點，除去兩者重疊的12個靶點，剩下的28個成分靶點即為YXST治療冠心病的間接作用靶點，結(jié)果見圖2。將42個直接靶點與28個間接靶點合并即得YXST治療冠心病的潛在靶點。70個潛在靶點信息見圖2。

2.3功能注釋及通路分析

對YXST治療冠心病的潛在靶點進行GO功能注釋分析，結(jié)果見圖3。70個潛在靶點主要富集于胞外刺激反應、氧化應激反應、炎癥反應的調(diào)節(jié)、活性氧代謝過程的正調(diào)控、藥物反應等生物過程(biological process，BP)；主要涉及膜筏、膜區(qū)、囊腔、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)內(nèi)腔、血漿脂蛋白顆粒等細胞組分(cellular component，CC)；主要影響MAP激酶活性、信號轉(zhuǎn)導-絲氨酸/蘇氨酸激酶活性、核心啟動子序列特異性DNA結(jié)合、血紅素結(jié)合、受體調(diào)節(jié)活性、細胞因子受體結(jié)合等分子功能(molecular function，MF)。進一步對潛在靶點進行KEGG通路富集分析發(fā)現(xiàn)，YXST治療冠心病主要涉及晚期糖基化終末產(chǎn)物-晚期糖基化終末產(chǎn)物受體(advanced glycationend products-receptor foradvanced glycationend products，AGE-RAGE)、動脈粥樣硬化、TNF、IL-17、C型凝集素受體、Th17細胞分化、Toll樣受體等信號通路，結(jié)果見圖4。

2.4網(wǎng)絡(luò)的構(gòu)建及分析

YXST“入血成分-潛在靶點”網(wǎng)絡(luò)共包含86個節(jié)點，矩形表示入血成分有16個，圓形表示潛在靶點有70個；邊共有191條，表示化合物和靶點之間的聯(lián)系，結(jié)果見圖5。利用Network Analyzer插件對網(wǎng)絡(luò)的拓撲性質(zhì)進行分析，以節(jié)點度、介數(shù)中心度和緊密中心度為標準對入血成分和潛在靶點分別進行篩選，詳細信息見表2。3項數(shù)值均在平均值以上的關(guān)鍵化合物有3個，為大豆苷、小檗堿、葛根素。3項數(shù)值均在平均值以上的關(guān)鍵靶點有16個，為PTGS2、PTGS1、NOS2、ESR1、NOS3、HSP90AA1、ADRB2、ESR2、MAPK14、CASP3、JUN、PPARG、AKT1、TNF、MAPK3、MAPK1。這些成分和靶點很有可能是YXST治療冠心病的藥效物質(zhì)和作用靶點。

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