應(yīng)用Design—Expert8.0.6軟件對表3中數(shù)據(jù)進(jìn)行二次多元回歸擬合，得到二次多項(xiàng)回歸方程

Y=5.21+0.34A+O.25B+0.31C-0.19D+0.38AC+0.17BC-0.22CD-0.19A₂-0.36B₂-0.27C₂-0.49D₂。

由表4方差分析結(jié)果可知，回歸模型的回歸效果顯著(P＜0.05)，線性系數(shù)較好(R²=0.9986)，說明建立的數(shù)學(xué)模型可以較好地描述實(shí)驗(yàn)結(jié)果，能夠分析和預(yù)測響應(yīng)值。表4中P值大小可以表明各因素對響應(yīng)值的影響，結(jié)果表明：料液比(A)、提取時(shí)間(B)、超聲功率(C)和提取次數(shù)(D)四個(gè)因素對相應(yīng)值的影響大小順序?yàn)榧碅＞C＞D＞B。

圖5是對牛舌革多糖提取的交互作用最顯著的兩個(gè)因素，料液比和提取次數(shù)的的響應(yīng)面，其曲面較陡，而其他因素交互作用不顯著，表現(xiàn)為曲面較為平滑，DesignExpert8.0.6軟件為響應(yīng)面分析提供了最佳條件優(yōu)化模塊，由軟件分析并考慮實(shí)際情況，將各因素條件取整，得到最佳提取工藝為：料液比為1∶40，提取時(shí)間為40min，超聲功率為200W，提取次數(shù)為3次時(shí)牛舌草多糖理論含量為l29.06mg/g。

3、驗(yàn)證試驗(yàn)

精密稱取牛舌草藥材粉末5g共3份置錐形瓶中，按篩選的最佳提取工藝提取，測定多糖含量，測得牛舌草多糖含量為128.36mg/g，與理論預(yù)測值誤差很小，說明該方程與實(shí)際情況擬合較好，所建模型正確，利用響應(yīng)面分析法得到的牛舌草多糖提取條件真實(shí)可靠，具有實(shí)用價(jià)值。

4、牛舌草多糖體外抗DNA氧化損傷結(jié)果

用·OH誘導(dǎo)損傷DNA，會生成丙二醛(MDA)類似物，該物質(zhì)在酸性條件和TBA反應(yīng)后產(chǎn)生的粉紅色物質(zhì)，在532nm處有最大吸收，因此，基于TBA法測定MDA類似物相對含量，能夠?qū)NA的損傷程度進(jìn)行間接評估。如圖6所示，在0.2～2.0mg/mL濃度范圍內(nèi)，牛舌草多糖能夠抑制生成MDA類似物的形成，其效應(yīng)具有濃度依賴性，在濃度達(dá)到1.6mg/mL時(shí)其抑制效應(yīng)最高，對DNA的保護(hù)率達(dá)到57.38％，IC₅₀值為1.4mg/mL，提示牛舌草多糖對DNA氧化損傷具有一定的保護(hù)作用。

三、結(jié)論

植物多糖的提取方法主要包括加熱回流法、超聲波輔助提取法、微波輔助提取法等方法，不同提取方法采用的條件對植物多糖的提取率有較大的影響，所以需要對提取工藝參數(shù)進(jìn)行優(yōu)化，以提高植物多糖的提取率。響應(yīng)面法是基于合理的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)方法并通過對得到的數(shù)據(jù)進(jìn)行多元二次回歸方程分析來擬合因素與響應(yīng)值之間的函數(shù)關(guān)系，尋求最佳工藝參數(shù)，響應(yīng)面法可以更好地反映多個(gè)因素多水平之間的變化關(guān)系，已被廣泛地用于天然成分提取工藝的優(yōu)化。本實(shí)驗(yàn)結(jié)合單因素試驗(yàn)和響應(yīng)面分析法對超聲輔助提取牛舌草多糖的工藝條件進(jìn)行了優(yōu)化，獲得了最佳提取工藝條件，其最佳工藝為料液比為1∶40，提取時(shí)間為40min，超聲功率為200W，提取次數(shù)為3次，在此工藝條件下牛舌草多糖的得率為128.36mg/g，然而，在實(shí)際生產(chǎn)過程中要考慮溶劑消耗和回收耗能等問題，可以適當(dāng)?shù)恼{(diào)整工藝。

DNA氧化損傷發(fā)生突變是導(dǎo)致衰老、癌癥等疾病發(fā)生的一個(gè)重要原因，活性氧對生物機(jī)體有毒害作用，毒性最大的是·OH，可以引起蛋白質(zhì)變性，DNA斷裂，而DNA作為人體重要的遺傳物質(zhì)，受損會引起染色體突變，畸形等。細(xì)胞內(nèi)過多的活性氧，如·OH、超氧陰離子等均是造成DNA氧化損傷的主要來源，因此，尋找天然的抗DNA氧化損傷化合物或者天然產(chǎn)物是一個(gè)研究方向，可以預(yù)防上述疾病的發(fā)生。本實(shí)驗(yàn)通過紫外分光光度法測定了牛舌草多糖對·OH誘導(dǎo)的DNA氧化損傷的保護(hù)作用，結(jié)果表明牛舌草多糖具有顯著的抑制DNA氧化損傷作用，當(dāng)濃度達(dá)到1.6mg/mL時(shí)，具有最佳保護(hù)作用，為牛舌草開發(fā)利用提供了一定的科學(xué)依據(jù)。

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