胭脂蟲紅色素是近年來(lái)逐步受到廣泛應(yīng)用的天然色素，是從寄生在仙人掌上的胭脂蟲雌蟲體內(nèi)提取出的一種天然蒽醌類色素，主要成分是胭脂紅酸。20世紀(jì)90年代，我國(guó)首次從國(guó)外引進(jìn)胭脂蟲，并人工繁養(yǎng)成功，2002年在云南省有規(guī)劃種植胭脂蟲。胭脂蟲紅因其穩(wěn)定、安全等特點(diǎn)，已成為優(yōu)質(zhì)的食用色素，它是一種美國(guó)食品和藥品監(jiān)督管理局（FDA）允許既可用于食品，又可用于藥品和化妝品的天然色素。

國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB2760-2014中對(duì)胭脂蟲紅在不同種類食品中的使用限量進(jìn)行了要求。國(guó)外一般采用美國(guó)化學(xué)品法典（FCC）的標(biāo)準(zhǔn)法測(cè)定胭脂蟲以及其相關(guān)產(chǎn)品中的胭脂蟲紅的含量，我國(guó)食品添加劑委員會(huì)則采用吸光度來(lái)表示胭脂蟲紅的含量，但是以上兩種方法不能應(yīng)用于食品中胭脂蟲紅含量的測(cè)定。近年來(lái)食品中胭脂蟲紅的相關(guān)檢測(cè)方法的研究不斷出現(xiàn)，如反相薄層色譜（TLC）/光密度掃描分析法、高效毛細(xì)管電泳法、液相色譜法和超高效液相色譜—質(zhì)譜聯(lián)用法，但是以上研究所涉及的食品種類較少。本文針對(duì)不同類型食品，包括糕點(diǎn)、餅干、糖果、巧克力、熟肉制品等五種，研究了胭脂蟲紅提取的前處理方法，建立了高效液相色譜法測(cè)定食品中的胭脂蟲紅的含量，可為以后食品中胭脂蟲紅的監(jiān)督檢測(cè)提供有效的參考方法。

一、實(shí)驗(yàn)部分

1、樣品采集

采集了5種不同類型的樣品，包裝規(guī)格分為盒裝、袋裝及散裝，分別為雙莓味紅絲絨蛋糕、香腸（原味）、棒棒糖、草莓味夾心餅干、巧克力豆。以上樣品依次編號(hào)為1～5#。

2、儀器與試劑

Agilenttechnologies1260型高效液相色譜儀（美國(guó)Agilent）；分析天平（德國(guó)Sartorius）；臺(tái)式冷凍離心機(jī)3K15（德國(guó)SIGMA）；恒溫水浴鍋DKZ-2B（上海精宏）；旋渦混勻器基本型-MS3basic（德國(guó)IKA）；聚酰胺固相萃取小柱（60mg/3mL）。

胭脂紅酸（CAS1260-17-9，純度91.7%，德國(guó)Dr.EhrenstorferGmbH）；乙腈；0.01%、0.05%、0.1%甲酸水溶液；0.1%磷酸水溶液；2mol/L鹽酸溶液；酸化甲醇（甲酸∶甲醇=1∶50；v∶v）；氨水甲醇（體積分?jǐn)?shù)為5%的氨水∶甲醇=1∶1；v∶v）；超純水。

3、實(shí)驗(yàn)條件

（1）標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

準(zhǔn)確稱取胭脂蟲紅酸標(biāo)準(zhǔn)品0.1090g（精確稱量至0.0001g）于100mL容量瓶中，用超純水溶解、定容，配制成質(zhì)量濃度為1000mg/L的儲(chǔ)備液（于4℃下保存，保存期3個(gè)月）。以胭脂紅酸標(biāo)準(zhǔn)溶液為母液，以超純水為稀釋液配制成質(zhì)量濃度分別為2.50、5.00、10.0、20.0、40.0、100mg/L系列標(biāo)準(zhǔn)溶液，現(xiàn)配現(xiàn)用。

（2）樣品前處理

①樣品的制備：將樣品用粉碎機(jī)充分粉碎，后裝入潔凈的可密封盛樣容器中，密封并標(biāo)明標(biāo)記，于0℃～4℃冷藏保存。

②樣品的提取與凈化：稱取粉碎均勻的樣品2g置于50mL離心管中，加入2mol/L鹽酸溶液10mL，旋緊蓋子，置于80℃水浴中30min，取出冷卻，之后再加入甲醇15mL，振搖混勻，待凈化。

（3）色譜條件

（a）色譜柱：Agilent5TC-C185μm×4.6mm×150mm；

（b）柱溫：35℃；

（c）進(jìn)樣量：20μL；

（d）檢測(cè)波長(zhǎng)：276nm；

（e）流速：1.0mL/min；

（f）流動(dòng)相：A：0.05%甲酸水溶液；B：乙腈；梯度洗脫程序見(jiàn)表1。

二、結(jié)果與討論

1、色譜條件的選擇

（1）檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇通過(guò)二極管陣列檢測(cè)器（DAD檢測(cè)器）在190～600nm處進(jìn)行掃描，結(jié)果見(jiàn)圖1，發(fā)現(xiàn)胭脂紅酸在紫外區(qū)最大吸收波長(zhǎng)為276nm，在可見(jiàn)光區(qū)最大吸收波長(zhǎng)為494nm。為對(duì)兩個(gè)波長(zhǎng)的檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行比較，本研究檢測(cè)波長(zhǎng)同時(shí)選擇276nm和494nm。如圖2所示，胭脂紅酸在276nm處吸收峰響應(yīng)值最大，峰形較好。在494nm處峰形最好，且雜質(zhì)干擾較小，但響應(yīng)值不如276nm。為了達(dá)到更低的檢出限，減少定量誤差，試驗(yàn)選擇檢測(cè)波長(zhǎng)為276nm。

（2）流動(dòng)相的選擇

本實(shí)驗(yàn)選用TC-C18（4.6mm×150mm，5μm）柱，通過(guò)實(shí)驗(yàn)分別比較了不同類型、不同比例的流動(dòng)相的分離效果。在考慮色譜柱的耐酸性能基礎(chǔ)上，實(shí)驗(yàn)分別用純水、磷酸溶液、甲酸溶液作為水相，乙腈為有機(jī)相，共研究了乙腈-純水、乙腈-磷酸溶液、乙腈-甲酸溶液三種體系對(duì)測(cè)定的影響。結(jié)果表明使用乙腈-純水作為流動(dòng)相時(shí)，完全洗脫不出；使用乙腈-磷酸溶液作為流動(dòng)相時(shí)，出峰時(shí)間較慢，峰形出現(xiàn)拖尾現(xiàn)象；使用乙腈-甲酸溶液作為流動(dòng)相時(shí)，分離效果好，峰形對(duì)稱。

實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，pH的降低有利于改善胭脂紅酸的峰形。本實(shí)驗(yàn)比較了分別以0.01%甲酸溶液和0.05%甲酸溶液作為流動(dòng)相的分離效果，如圖3。甲酸濃度為0.01%時(shí)，出峰時(shí)間延后，響應(yīng)值足夠高，然而峰形出現(xiàn)拖尾現(xiàn)象，峰較寬且不對(duì)稱；甲酸濃度為0.05%時(shí)，響應(yīng)值足夠高且峰形效果好。因此本實(shí)驗(yàn)選擇乙腈-0.05%甲酸溶液體系作為流動(dòng)相，梯度程序淋洗。

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