渾濁紅球菌PD630在培養(yǎng)基中降解AFB1的效果與培養(yǎng)基中AFB1濃度密切相關。如圖5所示，當培養(yǎng)基中的AFB1濃度為0.25、0.5μg/mL時，AFB1含量在24h內急劇減少，含量分別為18.14%、26.12%，36h～72h降解效果逐漸趨于穩(wěn)定，72h后含量分別穩(wěn)定在3.90%和6.45%。當培養(yǎng)基濃度為1、2μg/mL時，在24h內AFBI的降解趨勢較為平緩，培養(yǎng)72h后AFB1含量為19.52%及33.59%?？梢缘贸?，當培養(yǎng)基中的AFB1濃度較低時，降解是一個快速的過程，而當培養(yǎng)基中的AFBI濃度較高時，則降解過程相對變得緩慢。張銘的研究結果顯示出相似的趨勢，當培養(yǎng)基中AFB1濃度較低時（50、100、200、500ng/mL），短黃桿菌3J2M0降解速率較快，而當AFB1濃度增加到1000ng/mL時則降解速率顯著降低。
 

6、無細胞.上清、菌細胞懸液、胞內裂解物對黃曲霉毒素B1的降解活性

目前，對微生物脫除毒素的機制研究有兩點：一種是細菌菌體細胞壁的吸附作用，主要是通過細胞壁上β-葡聚糖、肽聚糖等多糖或功能蛋白的疏水相互作用進行吸附，常見的菌種如乳酸菌、酵母菌等。二是通過菌體培養(yǎng)過程所產生的胞內或胞外活性物質，破壞毒素結構從而起到降解作用，常見的菌種例如芽孢桿菌、假單胞菌等。如圖6所示，PD630無細胞上清對AFB1的降解活性顯著高于菌細胞懸液、胞內裂解物。上清液培育72h后AFB1的殘留率僅為18.33%，而菌細胞懸液和胞內提取物處理72h后AFB1殘留率為48.79%及90.18%。結果表明PD630菌株對AFB1的脫除機制是降解作用而非吸附作用，且參與AFB1降解作用的活性成分主要存在于上清液中。據文獻報道，YanliXie等研究發(fā)現(xiàn)，Pantoeasp.T6的無細胞上清液對AFB1的降解活性（68.30%）顯著高于活細菌細胞（4.87%）和細胞內細胞提取物（3.68%）。K.RakshaRao等從鹿糞便中分離的地衣芽孢桿菌CFR1無細胞上清在72h溫育后上清液降解活性達到93.67%，表明降解作用主要發(fā)生于地衣芽孢桿菌CFR1的無細胞上清中。

7、PD630菌株無細胞上清液對黃曲霉毒素B1的降解效果

如圖7所示，PD630培養(yǎng)上清液對AFB1的降解是一個快速的降解過程。在培育36h后AFB1的含量降低到28.72%并趨于穩(wěn)定，在培育72h后AFB1的含量僅為17.49%。與圖2相比，培養(yǎng)上清液處理AFB1的速率加快，PD630菌株培養(yǎng)48h后，培養(yǎng)基中AFB1的含量顯著性降低，AFBI殘留率僅為10.58%。當培養(yǎng)時間達72h后，AFB1殘留率穩(wěn)定在6.96%。實驗證明，渾濁紅球菌PD630菌株可以有效用于AFB1污染底物的生物修復。已有文獻報道關于AFB1的生物修復作用，XiaoshuangXia等人從土壤中篩選出一株枯草芽孢桿菌JSW-1，在AFB1終濃度為2.5μg/mL的NB培養(yǎng)基中培養(yǎng)72h后AFB1降解率為67.2%。SilivanoE.Mwakinyali等人研究發(fā)現(xiàn)短黃桿菌3J2M0在AFB1污染濃度為0.1μg/mL的LB培養(yǎng)基中溫育48h后，降解率可以達到93.82%。菌株與AFB1共培養(yǎng)實驗顯示培養(yǎng)48h后降解趨于穩(wěn)定，而上清液處理36h后降解效果則開始趨于穩(wěn)定。

8、加熱、EDTA蛋白酶K對無細胞上清降解黃[曲霉毒素B1活性的影響

如圖8所示，當無細胞上清中加入蛋白酶K和EDTA處理后時，上清降解AFB1的能力顯著降低。與不作任何處理的空白無細胞上清組相比，蛋白酶K處理后AFB1降解效果明顯降低，表明無細胞上清中存在蛋白質或者酶活性成，分參與了AFB1的降解。而加人作為金屬螯合劑的EDTA后，溫育結束后AFB1的含量甚至高達79.58%，這說明無細胞上清中的活性成分需要一些金屬陽離子輔助降解AFB1。最值得注意的是，當加熱處理（煮沸處理20min及1210C高溫高壓處理10min）無細胞上清時，上清降解AFB1的活性仍然存在，可以推測上清中參與AFB1降解的蛋白質或者酶活性成分具有優(yōu)秀的熱穩(wěn)定性。這種現(xiàn)象在文獻中有所報道，CuiqiongWang等發(fā)現(xiàn)鐮刀菌WCQ3361的無細胞上清液具有高熱穩(wěn)定性，煮沸10min后仍然保持99.40%的AFB1高降解活性。LancineSangare等發(fā)現(xiàn)銅綠假單胞菌N-17的無細胞上清用蛋白酶K處理后，降解率顯著下降；而上清液經過熱處理后（沸水浴10min），刺激提升了AFB1的降解活性，表明N17-1菌株降解AFB1有關的蛋白質或酶是熱穩(wěn)定的。XianShu等發(fā)現(xiàn)，貝萊斯芽孢桿菌DY3108（BacillusvelezensisDY3108）的培養(yǎng)上清液經過熱處理后，降解能力被刺激提升，從而推測為酶的熱活化（Thermalactivationofenzymes）現(xiàn)象。依據XianShu等的說法，由于大多數酶不能忍受工業(yè)生產苛刻的環(huán)境條件，因此熱穩(wěn)定酶因其耐熱性可以作為優(yōu)秀的酶催化劑替代品，承受工業(yè)過程中的苛刻反應條件，對最終應用十分有益。PD630菌株降解AFB1的酶活性成分的熱穩(wěn)定性使其潛在應用價值大大提高。

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