3、樣品前處理方法建立與優(yōu)化

（1）空白排查

空白試樣溶液在4種多環(huán)芳烴位置有目標(biāo)峰出現(xiàn)，是影響檢測準(zhǔn)確性的關(guān)鍵因素。本文對實驗中所用試劑、器具及玻璃器具清洗方式進(jìn)行了系統(tǒng)排查與驗證，結(jié)果表明：色譜純試劑對檢測結(jié)果影響較小，分析純試劑對檢測結(jié)果影響較大，純凈水不對檢測結(jié)果產(chǎn)生影響；卓越尼龍0.22μm針式過濾器對檢測結(jié)果影響最小；過濾乙腈時，塑料注射器對檢測結(jié)果的影響小于玻璃注射器；玻璃器具用色譜純正己烷、色譜純甲醇依次分別清洗一遍后可以滿足檢測需要。

（2）萬壽菊提取物前處理方法建立與優(yōu)化

采用GPC流動相超聲提取萬壽菊提取物中多環(huán)芳烴，樣品分散度差，不利于多環(huán)芳烴的提取，為使樣品在提取過程中處于溶解或分散狀態(tài)，本文驗證了丙酮、二氯甲烷、DMF、50％丙酮二氯甲烷、乙醇作為促溶溶劑時4種多環(huán)芳烴的分離效果。結(jié)果表明：丙酮作為促溶溶劑時，萬壽菊提取物在GPC流動相中分散度良好，4種多環(huán)芳烴分離度高。因此選擇丙酮作為萬壽菊提取物前處理的促溶溶劑。

（3）番茄提取物前處理方法建立與優(yōu)化

采用GPC流動相超聲提取番茄提取物中多環(huán)芳烴，樣品分散度和4種多環(huán)芳烴分離度良好，但加標(biāo)回收率低于60％。根據(jù)番茄提取物性質(zhì)，在前處理過程中加入二氯甲烷作為促溶溶劑，經(jīng)驗證樣品分散度和4種多環(huán)芳烴分離度良好，4種多環(huán)芳烴加標(biāo)回收率在65％～100％之間。因此選擇二氯甲烷作為番茄提取物前處理的促溶溶劑。

（4）葡萄籽提取物和綠咖啡豆提取物前處理方法建立與優(yōu)化

參考相關(guān)國標(biāo)和文獻(xiàn)，分別驗證了正己烷萃取，50％丙酮二氯甲烷萃取，水溶液萃取正己烷反萃取的液液萃取、甲醇水溶液萃取正己烷反萃取的液液萃取和乙醇水溶液萃取正己烷反萃取的液液萃取，不同萃取溶劑和萃取方式下的萃取效果。結(jié)果表明，乙醇水溶液萃取正己烷反萃取的液液萃取方式，4種多環(huán)芳烴分離度良好，加標(biāo)回收率在65％～107％之間。因此選擇乙醇水溶液萃取正己烷反萃取的液液萃取方式作為葡萄籽提取物和綠咖啡豆提取物的前處理方法。

（5）姜黃提取物前處理方法建立與優(yōu)化

采用GPC流動相超聲提取姜黃提取物中多環(huán)芳烴，樣品加標(biāo)回收率低，且污染凝膠滲透色譜柱；采用丙酮超聲提取姜黃提取物中多環(huán)芳烴，樣品完全溶解，雜質(zhì)多，且加標(biāo)回收率低；采用丙酮超聲提取姜黃提取物中多環(huán)芳烴，萃取液經(jīng)多環(huán)芳烴固相萃取柱凈化，4種多環(huán)芳烴分離度良好，加標(biāo)回收率在75％～85％之間。因此選擇丙酮超聲萃取、固相萃取柱凈化的方式作為姜黃提取物的前處理方法。

4、準(zhǔn)確度驗證

分別在萬壽菊提取物、番茄提取物、葡萄籽提取物、綠咖啡豆提取物和姜黃提取物樣品中添加2、5、10μg／kg  3個水平標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，每個添加濃度水平進(jìn)行6個重復(fù)測定。

用萬壽菊提取物精確稱取0.19萬壽菊提取物樣品(精確至0.00019)于25mL容量瓶中，用玻璃移液管加入2mL色譜純丙酮促溶，渦旋使其混合均勻后，加入GPC流動相定容，搖晃混合均勻，超聲溶解。使用玻璃注射器，用0.22um濾膜過濾至GPC進(jìn)樣管中，經(jīng)GPC凈化。

收集液使用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮至近干，氮?dú)獯蹈?，?mL 88％乙腈水溶液準(zhǔn)確定容，超聲溶解，樣品液使用一次性注射器過0.22μm濾膜，裝小瓶進(jìn)樣檢測。

用番茄提取物，精確稱取0.2～0.39番茄提取物樣品(精確至0.00019)于25mL具塞玻璃試管中，用玻璃移液管加入2mL色譜純二氯甲烷促溶，渦旋使其混合均勻后，加入GPC流動相定容，搖晃混合均勻，在40℃以上的超聲波清洗機(jī)中超聲提取30min。在3500r／min、5℃條件下離心5min。使用玻璃注射器，用0.22μm濾膜過濾至GPC進(jìn)樣管中，經(jīng)GPC凈化。收集液使用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮至盡干，氮?dú)獯蹈?，?mL 88％乙腈水溶液準(zhǔn)確定容，超聲溶解，樣品液使用一次性注射器過0.22μm濾膜，裝小瓶進(jìn)樣檢測。

用葡萄籽提取物和綠咖啡豆提取物。精確稱取0.3～0.59樣品(精確至0.00019)于10mL試管中，依次加入3mL超純水和0.5mL色譜純乙醇溶液，渦旋、超聲使其溶解，再加入2mL色譜純正己烷，渦旋混勻。在4000r／min、15℃條件下離心5min。綠咖啡豆提取物用移液槍將上層正己烷轉(zhuǎn)移至圓底燒瓶中，葡萄籽提取物用60℃～80℃水浴加熱溶液，使正己烷層溶解，再用移液槍將上層正己烷轉(zhuǎn)移至圓底燒瓶中，用正己烷重復(fù)萃取1次，合并正己烷溶液。氮?dú)鈱⒄和榇蹈桑?mL88％乙腈水溶液準(zhǔn)確定容，超聲溶解，樣品液使用一次性注射器過0.22μm濾膜，裝小瓶進(jìn)樣檢測。

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