1 前言

綠原酸類物質廣泛存在于多種植物中，常見的來源有金銀花、咖啡豆、杜仲等。最近的研究表明，甜葉菊中綠原酸類成分總含量可達1.7%～7.2%，主要的綠原酸類物質有綠原酸（3-CQA）、新綠原酸（5-CQA）、隱綠原酸（4-CQA），作為新的綠原酸類成分來源具有重要開發(fā)意義。然而綠原酸與異綠原酸分子中含有的鄰二酚羥基結構不穩(wěn)定，從植物提取過程中，受到高溫加熱、光照、pH變化易分解，造成提取率下降。

王冬萍等研究表明，異綠原酸A在酸性，低溫環(huán)境中較為穩(wěn)定，高溫、強堿、活波金屬離子及紫外光均可加速其降解。劉興勇等針對咖啡豆中的綠原酸類物質在烘焙過程中的降解進行研究，結果表明溫度和時間的交互作用均對咖啡豆綠原酸類成分含量產生極顯著影響。MoonJK等研究同樣表明，咖啡豆烘焙的方法導致豆類中的綠原酸濃度降低，因為在烘焙過程中綠咖啡豆中存在的綠原酸類成分有相當大比例被降解成揮發(fā)性成分。羅磊等的研究中，金銀花的綠原酸含量和L值隨干燥溫度、裝載量和氧體積分數(shù)的升高而降低，證實了綠原酸遇熱易分解。邱喜龍等考察了綠原酸在水溶液中的穩(wěn)定性，結果表明綠原酸在酸性、低溫條件下較穩(wěn)定。綠原酸在一定條件下可以轉化為新綠原酸等綠原酸類衍生物，主要影響其轉化的因素包括：溫度、pH、時間等。

本研究以甜葉菊綠原酸為研究對象，考察了光照、溫度、提取溶劑、金屬離子、氧氣對甜葉菊綠原酸穩(wěn)定性的影響，為綠原酸類成分的提取、加工條件和產品的儲存、運輸環(huán)境選擇具有一定的指導意義。

2 材料與方法

2.1 材料與試劑

材料：甜葉菊綠原酸產品，粉末（晨光生物科技集團股份有限公司）；甲醇，分析純（天津市科密歐化學試劑有限公司）；乙醇，分析純（天津市科密歐化學試劑有限公司）；鹽酸，分析純（天津市大茂化學試劑廠）；氫氧化鈉，分析純（天津市大茂化學試劑廠）；FeSO₄·7H₂O，分析純（天津市大茂化學試劑廠）；CuSO₄·5H₂O，分析純（天津市大茂化學試劑廠）。

2.2 儀器與設備

人工氣候箱（上海一恒科學儀器有限公司）；真空包裝機（北京吉奧德包裝機械有限公司）；電熱恒溫鼓風干燥箱（天津市華北實驗儀器有限公司）；pH計（上海三信儀表廠）；高效液相色譜儀e2695型（沃特世科技（上海）有限公司）；恒溫水浴鍋（上海森信實驗儀器有限公司）；電子分析天平，感量0.00001g（日本島津公司）。

2.3 色譜條件

試樣的前處理：原料需充分粉碎，保證40目篩通過率在95%以上，合并粉碎后樣品倒入混樣袋中，搖晃10min以上，充分混勻，稱取1g（精確至0.0001g）樣品至100mL容量瓶中，加入70%甲醇定容，超聲2h，冷卻至室溫后過0.45μm濾膜備用。

色譜條件：色譜柱：PhenomenexKinetex5μmC18100*4.6mm；檢測波長：330nm；柱溫：25℃；進樣量：3μL；流速：1.5mL/min；流動相A：0.1%三氟乙酸；流動相B：乙腈；緩沖液：乙腈∶水∶甲酸=100∶880∶20。

梯度條件見表1。

2.4 實驗方法

取甜葉菊綠原酸產品，用80%甲醇配制成20mg/mL的溶液，作為儲備液。

2.4.1 光照因素

取甜葉菊綠原酸產品，分為3組，均勻平鋪在透明袋中真空包裝，將3組樣品置于人工氣候箱中，溫度設定為25℃，光照強度分別設為0lx、3000lx、10000lx，放置20d后取樣檢測綠原酸產品中各組分含量變化情況。

2.4.2 溫度因素

取甜葉菊綠原酸產品于若干培養(yǎng)皿中，45℃、65℃、85℃、105℃下加熱，2h、6h、12h取樣檢測，并取25℃下綠原酸產品作為空白對照。

取儲備液于若干磨口錐形瓶中，稱重。分別置55℃、65℃、75℃、85℃下水浴回流加熱，隔2h、6h、12h取出，待錐形瓶冷卻至室溫后稱重，用80%甲醇溶液補至加熱前的重量，混勻后取樣檢測。

2.4.3 氧氣因素

分別精密量取100mL儲備液于4個磨口錐形瓶中，稱重。在25℃下，1～2號瓶通入氧氣，3～4號瓶通入氮氣，1、3號瓶在24h稱重補重后取樣檢測，2、4號瓶在48h稱重補重后取樣檢測。

2.4.4 pH因素

取綠原酸產品，用水配制成20mg/mL的溶液，分別精密量取100mL溶液于若干個錐形瓶中，錐形瓶分為兩組，一組調節(jié)pH至2.0、4.0、6.0、8.0、10.0后稱重，取樣檢測；另一組調節(jié)pH至2.0、4.0、6.0、8.0、10.0后稱重，25℃放置4h，取樣檢測。

2.4.5 金屬離子因素

取甜葉菊綠原酸產品，用80%甲醇配制成16.67mg/mL的溶液，取樣作為空白對照。精密量取100mL溶液于若干個錐形瓶中，錐形瓶分為兩組，一組加入30.3mL、60.6mL、121.2mL的1mmol/LCuSO4溶液；另一組加入30.3mL、60.6mL、121.2mL的1mmol/LFeSO4溶液。兩組溶液分別于0、4h取樣檢測。

3 結果與討論

下文中試驗數(shù)據(jù)均為單一測量值。

3.1 光照因素

甜葉菊綠原酸產品在0lx光照強度下總酸含量為24.67%，5-CQA含量為14.59%，含量無損失；3000lx光照下總酸含量減少1.3%，5-CQA含量減少0.31%；10000lx光照強度下總酸含量減少2.9%，5-CQA含量減少1.1%。數(shù)據(jù)表明光照強度越高，綠原酸類成分含量減少的幅度越大。

相關鏈接：綠原酸，氫氧化鈉，鹽酸，乙腈

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