茶葉是中國傳統(tǒng)植物來源飲品，具有悠久的飲用歷史。茶葉中富含多種營養(yǎng)成分和揮發(fā)性物質(zhì)，其主要活性物質(zhì)含量隨產(chǎn)地不同而有所差異，有效成分的種類和含量成為茶葉品質(zhì)的重要評價(jià)依據(jù)。根據(jù)茶葉采集和制作形式的不同可以分為綠茶、紅茶、黃茶、青茶（烏龍茶）、黑茶和白茶6大類。茶葉中最主要的抗氧化活性成分為茶多酚（Teapolyphenols，TP），茶多酚是一大類多羥基酚類化合物的總稱，除此之外，茶葉中還包含有咖啡堿、氨基酸、茶多糖和維生素等營養(yǎng)成分。茶多酚約占茶葉干重的20%～30%，是茶葉中最重要抗氧化保健成分。茶多酚主要包括黃烷醇類、花色苷類、黃酮類、黃酮醇類和酚酸類等，其中主要的揮發(fā)性成分是兒茶素類化合物約占60%～80%，包括兒茶素、表兒茶素、表沒食子兒茶素沒食子酸酯、表兒茶素沒食子酸酯、表沒食子兒茶素、沒食子酸和咖啡因等。茶葉中茶多酚種類和含量隨季節(jié)不同而變化，春季茶葉中表沒食子兒茶素沒食子酸酯（epigallocatechingallate，EGCG）含量要高于秋季。茶多酚具有抗氧化、調(diào)節(jié)免疫、解毒、抗輻射和抗疲勞等多種功效，但其組成及含量隨品種、采摘季節(jié)期及產(chǎn)地等多方面的影響。茶多酚通常從茶葉中提取，其中兒茶素類化合物占茶多酚的60%～80%，其次是黃酮類，其他酚類物質(zhì)較少。

茶多酚除存在在茶葉、茶樹花等多種茶樹資源中。沙棘中茶多酚根據(jù)提取工藝不同含量可以達(dá)到11.3%～16.9%。茶多酚也是核桃和枇杷中活性成分。毛枝連蕊茶中綠葉和紅葉植株葉片中可溶性糖、茶多酚和總花青苷。

茶多酚易溶于熱水、乙酸乙酯、乙醇，微溶于油脂，難溶有機(jī)溶劑。茶多酚具有一定的吸濕性，可進(jìn)行絡(luò)合反應(yīng)、氧化還原反應(yīng)等。納米磁珠可以實(shí)現(xiàn)茶多酚的快速提取分離。茶葉中茶多酚在提取過程中特別是加熱時(shí)可能受到破壞，在定量分析的過程中需建立可靠的分析方法實(shí)現(xiàn)定量。

兒茶酚中不同成分含量是進(jìn)行茶葉品質(zhì)等植物鑒別的重要依據(jù)。茶多酚為多酚類物質(zhì)具有天然抗氧化能力，在提取過程中可能會(huì)發(fā)生氧化還原反應(yīng)，所以合適的提取工藝條件對茶多酚的定量檢測至關(guān)重要。分光光度法是測定多酚類物質(zhì)含量的常用方法，主要包括紫外分光光度法。主要活性成分茶多酚、總皂苷、總黃酮和總多糖。茶多酚可以采用紅外光譜法進(jìn)行定性和定量檢測。液相色譜質(zhì)譜法測定茶葉中茶多酚操作更為復(fù)雜。紫外分光光度法測定相對靈敏度較低，紅外光譜法的定量測定屬半定量，茶多酚中多酚類物質(zhì)結(jié)構(gòu)接近均為兒茶素類結(jié)構(gòu)，同時(shí)茶多酚中多種活性成分物質(zhì)的種類和含量以及比例對評價(jià)茶葉品質(zhì)和進(jìn)行其他含有茶多酚植物品種鑒別具有重要意義。

本研究利用高效液相色譜法建立了同時(shí)測定6種主要茶多酚的同時(shí)定量分析方法，該方法可以用于茶葉等植物產(chǎn)品中茶多酚種類及含量的檢測，對植物鑒定和品質(zhì)確認(rèn)具有重要意義。白茶屬于輕微發(fā)酵茶，綠茶屬未發(fā)酵茶，均屬我國六大茶品種。白茶因獨(dú)特的健康價(jià)值及可陳放的特點(diǎn)而受到消費(fèi)者和投資者的青睞，產(chǎn)銷量與市場占有率不斷攀升，2013年～2016年，全國白茶年產(chǎn)量連續(xù)四年保持了15%左右的增幅。不同提取條件對茶葉中主要成分的溶出有影響。本研究利用響應(yīng)面法優(yōu)化茶葉中不同提取方法的提取工藝，選擇最優(yōu)提取工藝，在此基礎(chǔ)上利用高效液相色譜完成不同茶葉中茶多酚種類和含量定量測定，為茶葉品種和植物類型鑒別提供重要的方法學(xué)支持。

1 材料與方法

1.1 試劑與材料

沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)品（純度均≥98%）、沒食子酸兒茶素沒食子酸酯標(biāo)準(zhǔn)品（純度均≥98%）、表兒茶素標(biāo)準(zhǔn)品（純度均≥98%）、表沒食子酸兒茶素標(biāo)準(zhǔn)品（純度均≥98%）、表兒茶素沒食子酸酯標(biāo)準(zhǔn)品（純度均≥98%）、表沒食子酸兒茶素沒食子酸酯標(biāo)準(zhǔn)品（純度均≥98%），福林酚試劑（分析純），甲醇（色譜純）、甲酸（色譜純）、無水乙醇（分析純），試劑均購自阿拉丁公司。白茶樣品：貢眉白茶（產(chǎn)地福建福鼎，2018年），綠茶樣品：竹葉青（產(chǎn)地四川）。

1.2 儀器與設(shè)備

高效液相色譜（Agilent1260）：安捷倫科技（中國）有限公司；分析電子天平（AR224CN）：奧豪斯國際貿(mào)易（上海）有限公司；超聲波清洗機(jī)（SB-120DT）：上海予騰生物科技有限公司；集熱式恒溫加熱磁力攪拌器（DF-101S）：上海凌科實(shí)業(yè)發(fā)展有限公司；中藥材粉碎機(jī)（DFT150）：上海新諾儀器設(shè)備有限公司；紫外-可見分光光度計(jì)（UV-1800PC-DS2）：上海美譜達(dá)儀器有限公司。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 樣品制備

取茶葉樣品粉碎，準(zhǔn)確稱取0.5g茶葉粉碎過80目篩，干燥至恒重待用。

1.3.2 提取工藝優(yōu)化

本實(shí)驗(yàn)利用響應(yīng)面法優(yōu)化茶葉中茶多酚提取工藝。

1.3.2.1 單因素實(shí)驗(yàn)

選取超聲提取和熱水浸提兩種提取方法，提取時(shí)間、提取溫度、固液比、溶劑濃度4個(gè)單因素，利用單因素實(shí)驗(yàn)確定提取條件范圍。

1.3.2.2 CCD響應(yīng)面法提取

根據(jù)單因素試驗(yàn)結(jié)果，分別選取溫度、乙醇濃度、提取時(shí)間作為響應(yīng)變量，變量的水平以-1、0、1表示，以茶葉提取物中總酚含量為響應(yīng)值，利用軟件DesignExpert8.0.6進(jìn)行三因素三水平實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)和數(shù)據(jù)分析。茶葉中茶多酚提取配方優(yōu)化試驗(yàn)設(shè)計(jì)如表1所示。

1.3.2.3 總酚含量的測定

準(zhǔn)確稱取沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)品200mg加少量70％乙醇將樣品溶化，用70％乙醇定容至100mL搖勻，靜置。再用移液器吸取20mL，用70％乙醇定容至100mL，搖勻，配成濃度為400μg/mL的沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)溶液，待用。準(zhǔn)確吸取沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)溶液0mL、0.05mL、0.1mL、0.15mL、0.2mL、0.25mL于試管中。分別加入蒸餾水2.0mL、1.95mL、1.9mL、1mL、1.85mL、1.8mL、1.75mL再各加入福林試劑1mL，充分振蕩后靜置3～4min，分別加入10％碳酸鈉1mL于25℃，搖勻置于恒溫水浴中反應(yīng)2h，同時(shí)做試劑空白，于765nm下測定吸光度，以含量對吸光度進(jìn)行直線回歸，計(jì)算回歸方程。將提取液離心，取上清液，按標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制的測定方法，依次加入試劑，以試劑空白作參比，在765nm處測定吸光度，計(jì)算茶多酚含量作為響應(yīng)值。

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