5、結(jié)果計算

按下式計算樣品中每種黃曲霉毒素的濃度：

式中：c——試樣中每種黃曲霉毒素的濃度，μg/kg；

A——試樣按外標(biāo)法在標(biāo)準(zhǔn)曲線中對應(yīng)的濃度，μg/L；

V——試樣提取過程中提取液的體積，mL；

m——試樣的取樣量，g；

f——試樣溶液衍生后較衍生前的濃縮倍數(shù)。

計算結(jié)果表示到三位有效數(shù)字。

當(dāng)黃曲霉毒素B₁、黃曲霉毒素B₂、黃曲霉毒素G₁、黃曲霉毒素G₂的含量分別為25.0μg/L、6.25μg/L、25.0μg/L、6.25μg/L時，產(chǎn)生的色譜圖見圖1。

出峰順序為黃曲霉素G₁、黃曲霉毒素B₁、黃曲霉毒素G₂、黃曲霉毒素B_2。

二、赫曲霉毒素的檢驗

赭曲霉毒素A是一種強力的肝臟毒素和腎臟毒素并有導(dǎo)致畸形、導(dǎo)致突變和致癌作用。為此，國際癌癥研究機構(gòu)IARC其定為ⅡB類致癌物。食品法典委員會(CAC)對小麥、大麥、黑麥等谷物及其產(chǎn)品中赭曲霉毒素A限量為≤5.0μg/kg。

歐盟委員會(EU)對原糧中赭曲霉毒素A的限量沿用了CAC的限量規(guī)定，對谷物產(chǎn)品中的赭曲霉毒素A則進一步嚴(yán)格限量至≤3.0μg/kg。2005年1月1日對于上述法規(guī)中增加了限量標(biāo)準(zhǔn)：葡萄酒、其他用于飲料制作的葡萄酒和/或葡萄，2.0μg/kg；葡萄汁和其他飲料中的葡萄汁成分，2.0μg/ kg。

中國國家標(biāo)準(zhǔn)GB 2715-2005《糧食衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》對豆類中的赭曲霉毒素A限量為≤ 5.0μg/ kg。

1、原理

試樣中加入提取溶液后高速均質(zhì)提取并過濾、稀釋后，濾液經(jīng)過含有赭曲霉毒素A特異抗體的免疫親和柱色譜凈化，淋洗除雜，以洗脫溶液洗脫，洗脫液分別供熒光光度計或帶有熒光檢測器的高效液相色譜儀測定(以外標(biāo)法定量)。

2、試劑和材料

除非另有規(guī)定，試劑為分析純，水為重蒸餾水、去離子水或與之相當(dāng)?shù)募兯?/p>

①甲醇：色譜純。

②碳酸氫鈉。

③聚乙二醇(PEG8000)。

④氯化鈉。

⑤提取溶液：甲醇+水(80:20)；10g/L聚乙二醇+50g/L碳酸氫鈉溶液，pH 8.310g/L碳酸氫鈉溶液。

⑥吐溫20(Tween-20)。

⑦淋洗溶液：

a．淋洗緩沖液：稱取25g氯化鈉、5g碳酸氫鈉溶于水中，加入0.1mL Tween-20，用水稀釋至1L。

b．25g/L氯化鈉+5g/L碳酸氫鈉溶液：pH 8.1。

c．磷酸鹽緩沖溶液(PBS)/0.1％T’ween-20淋洗緩沖液：在1000mL PBS溶液中加入1.0mL Tween-2Q。

⑧磷酸鈉。

④ 六烷基三甲基溴酸銨(C-tab)。

⑤ 曲霉毒素A標(biāo)準(zhǔn)品：純度≥99％。

?赭曲霉毒素A標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液：用甲醇配制0.100mg/mL的赭曲霉毒素A標(biāo)準(zhǔn)儲備液，保存于4℃冰箱備用。

?赭曲霉毒素A標(biāo)準(zhǔn)工作溶液：準(zhǔn)確移取適量的赭曲霉毒素A標(biāo)準(zhǔn)儲備液。

?乙腈，色譜純。

?0.1mol/L氫氧化鈉。

?濃硫酸。

?0.05mol/L硫酸溶液。

?硫酸奎寧(C₂₀H₂₄N₂0₂·H₂S0₄·2H₂0)。

?熒光光度計校準(zhǔn)溶液：稱取3.40g硫酸奎寧，用0.05mol/L硫酸溶液稀釋至100mL，此溶液的熒光光度計讀數(shù)相當(dāng)于36。

3、儀器和設(shè)備

①高效液相色譜儀：配置熒光檢測器。

②熒光光度計。

③粉碎機。

④水平方向振蕩器。

⑤高速均質(zhì)器：18000～22000r/min。

⑥槽紋折疊濾紙。

⑦玻璃纖維濾紙。

⑧臺式離心機。

⑨玻璃注射器：10mL。

⑩空氣壓力泵。

⑩玻璃試管。

⑩微量注射器：100gL。

⑩赭曲霉毒素A免疫親和柱。

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