北方偉業(yè)計量集團有限公司
一、方法選擇的依據(jù)
糖料作物主要指甘蔗和糖用甜萊,它們所含糖分幾乎全是蔗搪。前者可直接壓汁測定糖含量,后者則須用水浸提后測定。測定蔗糖的的方法有旋光法、拆光法和容量法等,其中廣泛采用的是旋光法,其特點是簡單、快速、準確,但需用旋光計或檢糖計。比重法和折光法不夠準確。
沒有檢糖(旋光)計時,可以選用適于常量測定的化學方法,例如,蔗糖經HCI水解轉化后用銅還原-直接滴定法測定還原糖,再計算蔗糖的含量。
二、方法原理
旋光法測糖的原理是基于糖類分子具有不對稱碳原子,可使通過的光的偏振面旋轉。當光的波長、溫度和液層厚度一定時,溶液中蔗糖的濃度與偏振光面旋轉角度成正比,因此,可用旋光計或檢糖計測定蔗糖的含量。各種糖類都有其特定的比旋,例如蔗糖水溶液的比旋〔α] 20D為+66.5,葡萄糖是+52.8,果糖是一92.8,麥芽搪是+118等。
比旋光度〔α] 20D是指100mL溶液中含有l(wèi)00g旋光物質,通過液層厚度(即管長)I dm(分米),在溫度20oC時,鈉光源(D=589.3nm)偏振面所旋轉的角度。
式中:α——旋光儀測定的旋轉角度;
T——管長(dm);
V——溶液體積(mL);
W——旋光性物質(糖)質量(g)。
W /V為糖的濃度,用g/100mL表示時,則旋光角度
當管長一定時, ,式中k為常數(shù),隨旋光物質的比旋和管長而改變。蔗糖的比旋[α]20D為+66.5,如將管長固定為2dm,則
式中:m——與100mL溶濃相當?shù)臉悠焚|量(g)。
國際上為統(tǒng)一蔗糖旋光法測定的標準,檢糖計的標度采用國際度((0S)表示,即指26g純蔗搪在20oC時溶成100mL水溶液(相對密度為1.100),通過2dm旋光管的旋光角度規(guī)定為100 0S,直接刻有0S值的旋光計稱為檢糖(旋光)計。26g稱為糖品的1“規(guī)定量”。檢糖計的10S相當于100mL溶液中含有0.26g蔗糖,讀數(shù)為XoS,表示100 mL被測液中含有0.26×X0S(g)蔗糖。若樣品稱重為26g,制成糖溶液的體積為100 mL時,則每1 0S即表明樣品含蔗糖1%,用此測讀非常方便。蔗糖%=
如用旋光儀測定,旋光儀的讀尺刻度(3600)與檢精儀的讀尺刻度((100 0S)之間具有下述關系:
在20oC,國際糖標尺的標準石英板=1000S=34.6200土0.0020(D=589.3nm)
由于10S=O.26 g/100 mL蔗糖溶液,故:
式中α是一般旋光儀上讀得的角度數(shù)。
三、儀器及設備
旋光儀;檢糖計;電動植物搗碎機。
四、試劑
1、堿性乙酸鉛溶液:稱取Pb (OAc )2·3H2O(化學純)60g和PbO(化學純)20g加水10mL研磨,放入蒸發(fā)皿中,蓋上表面皿,在沸水浴上加熱至原黃色變白或紫白色,然后邊攪邊加190mL水,冷卻,澄清,過濾,密封保存。
2、飽和Na2SO4溶液:硫酸鈉(Na2SO4,化學純)加入水中至飽和。
3、酚酞指示劑:0.1g酚酞溶于100mL乙醇。
五、操作步驟
1、待測液制備將試樣按縱橫剖面均勻切細放入電動搗碎機的杯中與等量水搗成糊狀物。稱取52g糊狀物(即26g樣品),用熱水將其洗入100 mL容量瓶中,總體積約為90mL,放入800C恒溫水浴中加熱30min,其間搖動幾次,使糖分浸出。稍冷后,滴加1mL~5mL堿性乙酸鉛溶液以沉淀蛋白質。過量的乙酸鉛可滴加飽和Na2S4溶液除掉。冷卻后,用水定容(如液面有泡沫可滴加乙醚消除)。過濾,棄去初濾液20mL左右,取澄清液待測。
2、測定先用清亮的待測液洗旋光管2次~3次,然后將溶液裝滿管中,使管口液體呈一凸起,將活動的圓玻璃片與旋光管垂直方向插人蓋上(可避免留有氣泡)。將管蓋扭緊,檢查管中是否有氣泡。然后測讀旋光儀上的旋光度或栓糖計上的0S,取3次測讀的平均數(shù)。
六、結果計算
七、用于糖旋光的溫度校正
1、精糖——如果試驗≥99的糖旋光不是在200C的溫度下測定時,可用下列公式折算成200C的旋光:
P20=P1[1+0.0003(t一20)]
其中Pt=測定溫度t的旋光讀數(shù)(用于旋光≥96 0S的甜菜糖和粗蔗糖,不會有明顯的誤差)。
2、粗糖——當測定溫度不在200C時,如果粗蔗糖的旋光<96 0S,可以用下列公式計算到200C的旋光:
P20=Pt+0. 0015(Pt一80) (t一20)
式中:Pt和t與1同。
如果已知糖中果糖的%(假如蜂蜜和蔗糖制品=約1/2還原糖),用下列公式:
P20 = Pt+0.00035(Pt一20)一0.00812F(t一20)
式中:Pt和t同1中一樣;S為蔗塘%,F為果塘%。
如果糖的組分是平均的正常組分,則這些公式得出的結果與旋光計在20℃時獲得的結果十分一致。
參考資料:土壤農業(yè)化學分析方法
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